C. elegans Kas Alanı Ölçümleri: Çizgili Kas Morfolojisini Ölçmek İçin Standart Bir Yöntem

- C. elegans'ın iki tür kası vardır. Tek sarkomer veya çizgisiz kaslar, farenks ve vulvadakileri içerir. Çoklu sarkomer veya eğik çizgili kaslar, miyozin liflerinin düzenli çizgili deseni için adlandırılan eşkenar dörtgen şekilli vücut duvarı kaslarıdır.

Enine kesitte görüntülenen solucan gövdesinin dört çeyreğinde uzunlamasına yönlendirilmiş dört demet olarak kademeli çiftler halinde düzenlenirler. Her hücrenin hipodermis ve kütiküle eşit aralıklı birçok bağlantı noktası vardır. Bu düzenleme, kas kasılma dalgalarını düzgün harekete dönüştürmeye yardımcı olur.

Bu kasları görselleştirmek için, floresan konfokal mikroskopi ile transgenik olarak GFP işaretli miyozin ile hareketsiz hale getirilmiş solucanları görüntüleyin. Çizgili bir kas hücresinin alanını ve bu hücrenin lif modelindeki herhangi bir boşluğu ölçmek için analiz yazılımı kullanın. Kas lifi organizasyonundaki boşluklar, lif bozulması veya hücresel kalıntı birikimi nedeniyle bozulmayı gösterebilir. Bozulma miktarını tanımlamak için boşluk alanının toplam alana oranını hesaplayın. Örnek protokolde, Fiji kullanarak vücut duvarı kas morfolojisini nicel olarak değerlendireceğiz.

- Kas hücresi alanını ölçmek için, görüntüyü Fiji yazılımında açın ve tek bir eğik kas hücresinin etrafını dikkatlice izlemek için Çokgen Seçimi'ni kullanın. İzlemeyi iyileştirmek için bağlantı noktasını sürükleyerek çokgenin sonundaki çizgiyi ayarlayın. Yazılımın üst kısmındaki Analiz sekmesine gidin ve seçilen alanı hesaplamak için Ölç'e tıklayın.

Dejenere veya eksik bir bölgeye sahip kas hücreleri için, poligon seçim aracıyla eksik alanı izleyin ve tekrar Ölç'e tıklayın. Birden fazla boşluk varsa, her birini ayrı ayrı izleyin. Boşluk alanının tüm hücrenin alanına oranını hesaplayın. Yüksek bir oran, daha yüksek bir kas dejenerasyonu derecesini gösterir ve eksik bölge yoksa, oran sıfır olarak hesaplanır.