Epidermal Lazer Yarası: C. elegans'ta Onarım Süreçlerini İncelemek İçin Lokalize Hasara İndükleme

- Başlamak için, genç yetişkin solucanları bir slayt üzerindeki taze bir agaroz pedine aktarın. Daha sonra solucanları felç etmek için birkaç damla 12 milimolar levamisol çözeltisi ekleyin. Solucanları bir lamel ile örtün ve birkaç dakika bekleyin. Slaytı dönen bir disk konfokal mikroskobunun altına yerleştirin ve solucanın en yan dış yüzeyine odaklanın.

Yetişkin bir solucanın epidermisi, hücre füzyon olaylarından kaynaklanan çok çekirdekli sinsitlerden oluşan ince, tek katmanlı bir yapıdır. Epidermisin apikal yüzeyi esnek bir kollajen kütikül salgılarken, bazal yüzey bazal lamina adı verilen ince bir hücre dışı matris tabakası ile kaplıdır.

Daha sonra, epidermisin apikal yüzeyini bir lazerle yaralayın. Hasarlı hücrelerden gelen sitoplazma, yara bölgesinde bir kabarcık olarak ortaya çıkarak dışarı sızabilir.

Lazer ışınlama, iç dokulara zarar vermeden kütikül ve epidermal hücrelerin lokalize bozulmasına neden olduğu için iğne yaralama gibi diğer tekniklere göre bir avantaja sahiptir. Örnek protokolde C. elegans'ta lazerle yaralama işlemini göreceğiz.

- Nematodları hassas bir şekilde sarmak için bu protokol, dönen disk konfokal mikroskobuna bağlı bir femtosaniye lazer kullanır. İki f