JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 3:59 dk. • April 30th, 2023
- Enjeksiyona hazırlanmak için, bir agaroz ped üzerine bir parça halokarbon yağı koymak için bir solucan penası kullanın. Solucanları yağın içine yerleştirin ve nazikçe agar pedinin üzerine iterek hareketsiz hale getirin. Yağın hayvanları tamamen kapladığından emin olun. Kurumayı önlerken oksijenin solucanlara ulaşmasını sağlar. Daha sonra, agaroz pedini bir enjeksiyon mikroskobuna yerleştirin ve iğneyi bir gonad kolunun distal ucunu hedefleyerek solucana dik olarak konumlandırın.
İğneyi nazikçe kütikülden itin ve gonad koluna nükleik asit veya ilgilenilen bileşiği enjekte edin. Her gonad kolu, bireysel oositlere dönüşecek bir germ hattı sinsityumu içerir. Distal gonad içine enjekte edilen materyal bu oositlere dahil edilecek ve bir sonraki nesli etkileyecektir.
Solucanları enjekte ettikten sonra, yağı M9 tamponu ile değiştirin. Solucanlar hareket etmeye başladığında, onları bakteriyel gıda içeren bir NGM agar plakasına aktarın. Aşağıdaki protokolde, gonad mikroenjeksiyon yöntemi, dpy-10 genini hedeflemek ve düzenlemek için bir Cas9 kompleksi vermek için kullanılır.
- Metin protokolünde açıklandığı gibi C. elegans ve agaroz pedlerinin hazırlanmasıyla başlayın. Bir agaroz enjeksiyon
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin