JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 3:40 dk. • April 30th, 2023
- Transgenik solucan suşları oluşturmanın en basit yöntemi olan mikroenjeksiyon ile ekstrakromozomal DNA dizileri oluşturmak, hücre bölünmesi sırasında stabil bir şekilde iletilmeyen ve bu nedenle değişken kalıtım oranları ve ekspresyon seviyeleri sergileyen genetik elementlerle sonuçlanır. Diziyi bir kromozoma entegre etmenin amacı, bu genetik kararsızlığı ve değişkenliği azaltmaktır.
Bunu yapmak için, daha önce mikroenjeksiyonla tanıtılan ekstrakromozomal bir dizi taşıyan ve onların gravid yetişkinlere dönüşmelerine izin veren, yaşla senkronize edilmiş bir L4 transgenik solucan popülasyonu ile başlayın. Bu yetişkinleri yeni tabaklara aktarın ve her tabakta en az 30 yumurta olana kadar yumurtlamalarına izin verin. Yetişkinleri çıkarın ve yumurtaların L4 aşamasına ulaşana kadar büyümesine izin verin. Ardından, solucanları UV ışığı ile ışınlayın. Bu, genomik DNA'da rastgele çift iplikli kırılmalara neden olur, burada solucanların DNA onarım mekanizması diziyi keyfi olarak dahil edebilir.
Bir gecelik iyileşme döneminden sonra, hayatta kalan solucanların sayısını sayın. Ölü solucanların küçük bir yüzdesi verimli ışınlamayı gösterir. Homozigot entegre transgenik hatları izole etmek içi
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin