JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:59 dk. • April 30th, 2023
- İstenilen hücre yoğunluğunu içeren bir lösemi hücre süspansiyonu ile başlayın. Hücreleri serum içeren bir kültür ortamında santrifüjleyin ve yeniden süspanse edin. Serum ilavesi sürekli hücre büyümesini teşvik eder ve hücreler farklı hücre döngüsü aşamaları boyunca hareket eder. Hücreleri bir bromodeoksiuridin veya BrdU etiketleme çözeltisi içinde seyreltin ve gerekli süre boyunca fizyolojik koşullar altında büyütün.
Sentez veya S fazındaki hücreler, DNA replikasyon işlemi sırasında timidinin yerini alan bir timidin analoğu olan BrdU'yu alır. Fazla BrdU'yu çıkarmak için hücreleri santrifüjleyin ve hücreleri uygun bir ortamda yeniden süspanse edin. Hücreleri çok oyuklu bir plakaya aktarın. Hücrelerin farklı zaman dilimleri için fizyolojik koşullar altında büyümesine izin verin.
Çeşitli zaman periyotlarında, hücreler S, G2, mitoz ve G1 fazlarının geri kalanı boyunca ilerler ve bir sonraki hücre döngüsüne girerek hücre proliferasyonunun tahmin edilmesine izin verir. BrdU'yu florokrom antikoru ile etiketlemek için antikor boyaması yapın ve akış sitometrisi kullanarak hücre proliferasyonunu ölçün.
Akış sitometresinin içinde, florokromlar lazer enerjisini emer ve floresan verir. Çoğala
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin