JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:24 dk. • April 30th, 2023
- Bromodeoksiüridin veya BrdU, sentetik bir timidin nükleosit analogudur. Hücre döngüsünün sentez aşaması sırasında, BrdU timidinin yerini alır ve yeni sentezlenen DNA'ya entegre olur. Dahil edilmiş BrdU, hücre döngüsü ilerlemesinin izlenmesine izin verir. Dahil edilmiş BrdU'yu tespit etmek için, önce, hücreleri geçirgen hale getirmek için sabitleyin ve geçirgen hale getirin.
Daha sonra, DNA zincirlerini parçalamak ve dahil edilen BrdU'yu açığa çıkarmak için hücreleri DNAse enzimi ile tedavi edin. Daha sonra, uygun bir floresan etiketli anti-BrdU antikoru ekleyin. Antikor çekirdeğe girer ve DNA'da bulunan açıkta kalan BrdU'ya kolayca bağlanır.
Ek olarak, hücreleri uygun bir floresan DNA bağlayıcı boya ile tedavi edin. Boya, DNA'ya bağlanarak toplam DNA içeriğinin ölçülmesine izin verir. Hem etiketli BrdU hem de DNA'dan gelen floresansı tespit etmek için akış sitometrisi kullanın.
Etiketli DNA'dan gelen floresan yoğunlukları, toplam DNA içeriğindeki varyasyona bağlı olarak hücreleri farklı hücre döngüsü fazlarında farklılaştırır. BrdU'dan gelen floresan sinyali, BrdU içeren hücrelerin mevcut hücre döngüsü konumunu tanımlar.
Bu örnekte, akut lenfoblastik lösemi hücreleri olan NALM-6'
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin