Retro-Orbital Kan Örneklemesi: Bir Farenin Retro-Orbital Sinüsünden Mononükleer Hücreleri İzole Etmek İçin Bir Yöntem
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:18 dk. • April 30th, 2023
- İlk olarak, anestezi uygulanmış bir fareyi boynundan tutun ve gözü dışarı çıkarın. Gözün medial kantusuna ince bir kılcal tüp yerleştirin. Kanın kılcal hareketle bir tüpe akmasına izin verin. Kanı EDTA kaplı bir tüpe aktarın ve buz üzerinde tutun. EDTA, kalsiyum iyonlarını bağlayarak kanın pıhtılaşmasını önler. Daha düşük sıcaklık, hücrelerin glikolitik aktivitesini ve mikrobiyal kontaminasyon olasılığını azaltır.
Daha sonra, kanı EDTA içeren bir tamponla seyreltin ve iyice karıştırın. Kanı rahatsız etmeden, tabana dikkatlice uygun bir ayırma çözeltisi tabakası ekleyin. Süspansiyonu santrifüjleyin. Ayırma çözeltisindeki polimer, alttaki kırmızı kan hücrelerini ve tortuları toplar. Polimerden daha hafif olan mononükleer hücreler ve trombositler, polimerik gradyanın üzerinde birikir.
Plazma içeren üst tabakayı çıkarın ve mononükleer hücreler içeren opak beyaz halkayı toplayın. Artık plazma ve trombositleri çıkarmak için hücreleri PBS ve santrifüj kullanarak seyreltin. Daha fazla analiz için izole edilmiş mononükleer hücreleri kullanın. Aşağıdaki protokol, bir lösemik hücre hattı C1498 enjekte edilen konjenik bir fareden mononükleer hücrelerin izolasyonunu gösterecektir.
- Anestezi
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin