Retro-Orbital Kan Örneklemesi: Bir Farenin Retro-Orbital Sinüsünden Mononükleer Hücreleri İzole Etmek İçin Bir Yöntem

0 görüntüleme3:18 dk • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- İlk olarak, anestezi uygulanmış bir fareyi boynundan tutun ve gözü dışarı çıkarın. Gözün medial kantusuna ince bir kılcal tüp yerleştirin. Kanın kılcal hareketle bir tüpe akmasına izin verin. Kanı EDTA kaplı bir tüpe aktarın ve buz üzerinde tutun. EDTA, kalsiyum iyonlarını bağlayarak kanın pıhtılaşmasını önler. Daha düşük sıcaklık, hücrelerin glikolitik aktivitesini ve mikrobiyal kontaminasyon olasılığını azaltır.

Daha sonra, kanı EDTA içeren bir tamponla seyreltin ve iyice karıştırın. Kanı rahatsız etmeden, tabana dikkatlice uygun bir ayırma çözeltisi tabakası ekleyin. Süspansiyonu santrifüjleyin. Ayırma çözeltisindeki polimer, alttaki kırmızı kan hücrelerini ve tortuları toplar. Polimerden daha hafif olan mononükleer hücreler ve trombositler, polimerik gradyanın üzerinde birikir.

Plazma içeren üst tabakayı çıkarın ve mononükleer hücreler içeren opak beyaz halkayı toplayın. Artık plazma ve trombositleri çıkarmak için hücreleri PBS ve santrifüj kullanarak seyreltin. Daha fazla analiz için izole edilmiş mononükleer hücreleri kullanın. Aşağıdaki protokol, bir lösemik hücre hattı C1498 enjekte edilen konjenik bir fareden mononükleer hücrelerin izolasyonunu gösterecektir.

- Anestezi uygulanmış lösemik hayvanın gözünün medial kantusuna bir kılcal tüp yerleştirin. Orbital sinüsten kılcal boruya 100 ila 200 mikrolitre kan çekilecektir. Tüpü çıkarın ve steril bir gazlı bezin göze nazikçe uygulanmasıyla kanamayı kontrol edin. Daha sonra kanı bir EDTA tüpüne aktarın ve mononükleer hücre izolasyonu gerçekleşene kadar tüpü buz üzerinde saklayın.

Kan mononükleer hücrelerini izole etmek için, önce 500 mikrolitrelik bir son hacme kadar 1 milimolar EDTA ile desteklenmiş PBS ekleyin. Ardından, numuneyi bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın. Daha sonra, 30 mikrolitre ayırma solüsyonunu kanın altına dikkatlice yerleştirmek için 30 gauge iğne ile donatılmış 1 mililitrelik bir şırınga kullanın ve katmanları karıştırmamaya dikkat edin.

Hücreleri santrifüjleme ile ayırın ve opak beyaz mononükleer hücre tabakasını yeni bir mikrosantrifüj tüpüne aktarmak için bir pipet kullanın. Daha sonra bağışıklık hücrelerini 1 mililitre PBS'de yıkayın. Bunları santrifüjleyin ve peleti boyama ve akış sitometrisi ile analiz için 600 mikrolitre FACS tamponunda yeniden süspanse edin.

07:11

Rat Yanal Kuyruk Ven gelen Kan Örnekleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:42

Kuyruk damarlar bir vakum kan toplama sistemi ve gözlük büyüteç ile sigara anestezi farelerin koleksiyonundan değiştirilmiş kan

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:03

Farelerde subclavian ven delinme yoluyla kan toplama

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:01

Akış Sitometresi ile Primer Sıçan Retinalı Ganglion Hücrelerinin (RGC) İzolasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:15

Histolojik Muayene ve İmmünohistokimya için İntegral Göz Yüzey Dokusu Elde Etmek Için Bozulmamış Göz Küresinin İzolasyon

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:39

Retroorbital Ven Enjeksiyonunun Yenidoğan Kemirgen Modeli

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:56

Farelerde Dolaşımdaki Luteinize Edici Hormonu İndüklemek ve Ölçmek için Otomatik Kan Örneklemesi ile Birleştirilmiş Uzaktan Nöronal Aktivasyon

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:32

Terapötik Hematopoietik Kök/Progenitör Hücrelerin Toplanması için İn Vivo Osteo-organoid Yaklaşım

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:39

Primer Fare Retinal Glial Müller Hücrelerinin İzolasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:04

Yetişkin Farelerden Retinal Pigment Epitel Hücrelerinin İzolasyonu ve Kültürü için Basitleştirilmiş Bir Yöntem

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 1 Ağustos 2026