May-Grunwald Giemsa boyama: kemik iliği hücrelerini boyamak için bir yöntem

- May-Grunwald Giemsa veya MGG boyama, kemik iliği hücrelerinin veya BMC'lerin diferansiyel boyanması için iki aşamalı bir prosedürdür. Boyamaya başlamak için, bir cam slayt üzerinde konsantre tek katmanlı bir BMC lekesi elde edin. Lekenin kurumasını bekleyin. Hücreleri önce metanol içinde çözünmüş eozin ve metilen mavisi içeren May-Grunwald boyası ile tedavi edin.

Çözücü metanol başlangıçta hücreleri sabitler. Net pozitif yüklü bazik bir boya olan metilen mavisi, nükleik asitler gibi asidik hücresel bileşenleri lekeler. Net negatif yüklü asidik bir boya olan eozin, sitoplazmik katyonik proteinler gibi temel hücresel bileşenleri boyar. Boyanın çökelmesini ve hücresel malzemelerle iyi bir şekilde bağlanmasını sağlamak için hücrelere pH 6.8'lik bir tampon çözeltisi uygulayın.

Ek olarak, genel boyama etkisini arttırmak için hücrelere asidik ve bazik boyalar da içeren Giemsa boyası uygulayın. Temel boyalar, masmavi ve metilen mavisi, asidik bileşenlerin lekesini yoğunlaştırırken, asidik boya, eozin, temel bileşenlerin lekesini arttırır.

Mikroskop altında, eritrositler pembemsi kahverengi ve trombositler küçük mor noktalar olarak görünür. Granülositler mor-mavi çok loblu çekirdek ve kırmızı granül sitoplazma gösterir. Agranülositler, büyük mor-pembe bir çekirdeğe sahip berrak mavi görünür. Aşağıdaki protokolde kemik iliği hücrelerinin MGG boyamasını gösteriyoruz.

- Kemik iliği hücrelerini boyamaya hazırlamak için, önce slaytları önceden takılmış filtre kartlarıyla tek kullanımlık odalara yerleştirin ve odaları bir sitosantrifüje yerleştirin. Her filtre kartı bölmesine 100 mikrolitre FACS tamponu ekleyin ve slaytları kısaca santrifüjleyin. Döndürmenin sonunda, her odaya 100 mikrolitre hücre ekleyin ve hücreleri santrifüjleyin.

Ardından, havayla kurutma için slaytları odalardan dikkatlice çıkarın. Kemik iliği hücrelerini boyamak için, slaytları 5 dakika boyunca May-Grunwald çözeltisi içeren bir Coplin kavanozuna daldırın. Daha sonra, slaytları 1 dakika boyunca pH'ı 6.8 olan bir tampon çözeltisi kavanozuna aktarın. Ardından slaytları 10 dakika boyunca Giemsa R solüsyonuna aktarın ve ardından pH nötr suyla 10 saniyelik bir yıkama yapın.

Yıkamadan sonra, slaytların kurumasını bekleyin ve her numuneye bir damla montaj ortamı uygulayın. Ardından, bir kapak camının bir kenarını sürgünün üzerine yerleştirin ve hava kabarcıklarını gidermek için hafifçe bastırarak kapak camını dikkatlice hücrelerin üzerine indirin.