Yoğunluk Gradyanlı Santrifüjleme: CLL Hücrelerini Periferik Kandan İzole Etmek İçin Bir Yöntem

0 views • 3:40 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- Kronik lenfositik lösemi veya KLL hastalarında, B hücreli lenfositler kemik iliğinde ve kanda önemli ölçüde artar. Bu KLL hücrelerini bir kan örneğinden izole etmek için, önce numuneyi, negatif seçim kullanarak B hücrelerini ayıran bir insan B hücresi zenginleştirme kokteyli ile tedavi edin. Kokteyldeki antikorlar, B olmayan hücreler ve eritrositler tarafından eksprese edilen antijenleri spesifik olarak tanır ve çapraz bağlar ve yoğun kompleksler oluşturur.

Daha sonra, numuneyi lenfosit izolasyonu için en uygun yoğunluğa sahip bir yoğunluk gradyan ortamı üzerine katmanlayın. Daha sonraki santrifüjleme ile, farklı kan bileşenleri, gradyan ortamına göre yoğunluklarındaki değişikliklere bağlı olarak ayrılır. Daha yüksek yoğunluklu RBC-non-B-hücre kompleksleri, ortam boyunca çökerek bir pelet oluşturur. En az yoğun plazma fraksiyonu en üst tabakayı oluşturur. Daha az yoğun KLL hücreleri, plazma yoğunluklu ortam arayüzünde beyaz bir tabaka oluşturur.

Beyaz tabakayı dikkatlice yeni bir tüpe aktarın. Saflaştırılmış CLL hücreleri içeren bir pelet elde etmek için tekrar santrifüjleyin. Aşağıdaki protokolde, hasta kan örneklerinden kronik lenfositik lösemi hücrelerinin izolasyonunu gösteriyoruz.

- Daha önce kabul edilen kronik lenfositik lösemi hastalarından EDTA kan alma tüplerinde beyaz hücre sayımı ile birlikte periferik kan örnekleri alın.

- İnsan kan örnekleri, potansiyel olarak kan yoluyla bulaşan virüsler içerdiğinden tehlikeli olarak kabul edilmelidir. Lütfen bu numunelerin Sınıf II Biyogüvenlik Kabininde işlendiğinden ve kullanıcının her zaman laboratuvar önlüğü ve eldiven giydiğinden emin olun. Kanla kirlenmiş malzemeleri atın ve dezenfekte edin.

- Beyaz hücre sayısı mililitrede 40 milyon hücreye eşit veya daha büyükse, numuneyi RT CLL yıkama tamponu ile 1'e 1 oranında seyreltin. Ardından, RT yoğunluk gradyan ortamını numune için uygun boyutta bir konik santrifüj tüpüne alikot edin. Numuneyi dikkatlice ortamın üzerine yerleştirin ve RT'de 30 dakika boyunca 400 kez G'de santrifüjleyin.

Plastik bir pastör pipeti kullanarak, yoğunluk gradyan ortamının ve CLL yıkama tamponunun arayüzünde toplanan beyaz mononükleer hücre tabakasını nazikçe hasat edin. Bu izole edilmiş tek tabakayı 50 mililitrelik yeni bir konik santrifüj tüpüne aktarın. Hücreleri yıkamak için, bu tek tabakaya 40 mililitre CLL yıkama tamponu ekleyin ve oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 300 kez G'de santrifüjleyin.

Süpernatanı atın, peleti yeniden askıya almak için tüpün altına hafifçe vurun ve bu yıkamayı tekrarlayın. Süpernatanı atın, tüpün altını tekrar hafifçe vurun ve ardından hücre peletini, peletin boyutuna bağlı olarak belirli bir hacimde CLL yıkama tamponunda yeniden süspanse edin. Hücreleri saydıktan ve hücre saflığını kontrol etmek için akış sitometrisinden sonra, hücreleri gerekli hücre yoğunluğunda, stimülasyona veya ilaç tedavisine hazır doku kültürü plakalarına yerleştirin.

07:11

Enzimatik Digest ve Gradient Ayırma kullanma Fare Skin gelen sızan lökositlerin İzolasyonu

Related Videos

0 Views

10:21

Karakterizasyonu ve yoğunluk Gradient Santrifüjü tarafından fare birincil Microglia izolasyonu

Related Videos

0 Views

03:28

Sperm yoğunluğu degrade Santrifüjü kullanarak fark kalitesini topluluğu

Related Videos

0 Views

05:23

İnsan Bağışıklık Sistemi Fareleri Oluşturmak için Kordon Kanı Hematopoetik Kök Hücrelerinin İzole Edilmesi

Related Videos

0 Views

14:04

Nötrofil İzolasyon ve Analiz Terapötik Ajanların için Lenfoma Hücre Duyarlılık kendi Rolü belirleme

Related Videos

0 Views

09:09

Birincil Akut lenfoblastik lösemi hücreleri hazırlanmasında farklı hücre döngüsü aşamaları santrifüj Elutriation tarafından

Related Videos

0 Views

09:52

Roman NFAT2 hedef genleri kronik lenfositik lösemi olarak tanımlamak için bir kromatin Immunoprecipitation tahlil

Related Videos

0 Views

07:39

CD4 yalıtım+ T-hücreleri ve T foliküler Yardımcısı (cTfh) hücre alt kümeleri üzerinden periferik kan kullanarak 6-renk Akış Sitometresi Analizi, dolaşan

Related Videos

0 Views

11:39

Nükleer/Sitoplazmik Protein Ticaretini İzlemek Için Primer Kronik Lenfositik Lösemi Hücrelerinin Subsellüler Fraksiyonları

Related Videos

0 Views

08:12

İnsan Nötrofillerinin Tam Kan ve Buffy Coats'tan İzolasyonu

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026