Yoğunluk Gradyanlı Santrifüjleme: CLL Hücrelerini Periferik Kandan İzole Etmek İçin Bir Yöntem

- Kronik lenfositik lösemi veya KLL hastalarında, B hücreli lenfositler kemik iliğinde ve kanda önemli ölçüde artar. Bu KLL hücrelerini bir kan örneğinden izole etmek için, önce numuneyi, negatif seçim kullanarak B hücrelerini ayıran bir insan B hücresi zenginleştirme kokteyli ile tedavi edin. Kokteyldeki antikorlar, B olmayan hücreler ve eritrositler tarafından eksprese edilen antijenleri spesifik olarak tanır ve çapraz bağlar ve yoğun kompleksler oluşturur.

Daha sonra, numuneyi lenfosit izolasyonu için en uygun yoğunluğa sahip bir yoğunluk gradyan ortamı üzerine katmanlayın. Daha sonraki santrifüjleme ile, farklı kan bileşenleri, gradyan ortamına göre yoğunluklarındaki değişikliklere bağlı olarak ayrılır. Daha yüksek yoğunluklu RBC-non-B-hücre kompleksleri, ortam boyunca çökerek bir pelet oluşturur. En az yoğun plazma fraksiyonu en üst tabakayı oluşturur. Daha az yoğun KLL hücreleri, plazma yoğunluklu ortam arayüzünde beyaz bir tabaka oluşturur.

Beyaz tabakayı dikkatlice yeni bir tüpe aktarın. Saflaştırılmış CLL hücreleri içeren bir pelet elde etmek için tekrar santrifüjleyin. Aşağıdaki protokolde, hasta kan örneklerinden kronik lenfositik lösemi hücrelerinin izolasyonunu gösteri