JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:25 dk. • April 30th, 2023
- Lösemik hücrelerde, çekirdek ve sitoplazma arasındaki birkaç tümör baskılayıcı protein gibi makromoleküllerin geçişi deregüle edilir. Bu proteinlerin yanlış lokalizasyonu onları inaktif hale getirir ve lösemik hücrelerin kontrolsüz büyümesine neden olur. Lösemik hücrelerden sitoplazmik ve nükleer fraksiyonu üreterek bu tür proteinlerin anormal konumunu belirleyebiliriz.
İstenilen hacimde lösemik hücreleri bir mikrofüj tüpüne alarak başlayın ve hücreyi peletlemek için santrifüjleyin. Peleti hipotonik bir lizis tamponunda yeniden süspanse edin ve ardından istenen konsantrasyonda deterjan ekleyin. Hipotonik lizis tamponu, hücrelerin şişmesine ve plazma zarını kırmasına neden olur, bu da nükleer zarı sağlam bırakır, böylece sitoplazmik fraksiyonları izole eder. Deterjan, sitoplazmik organellerden proteinlerin ekstraksiyonuna yardımcı olur.
Parçalanmış hücreleri süspansiyon halinde santrifüjleyin ve süpernatanı yeni bir tüpe aktarın. Süpernatant, hücrenin sitoplazmik fraksiyonunu içerir. Nükleer fraksiyonu hazırlamak için, kalan peleti tam lizis tamponunda tekrar süspanse edin ve deterjan ekleyin. Süpernatantta bulunan nükleer fraksiyonu santrifüjleyin ve bir mikrofüj tüpüne toplayın.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin