Fare Arka Uzvundan Kemik İliği Alımı

- Kemik iliği, kemiklerin içi boş merkezinde bulunan süngerimsi jelatinimsi dokudur. Bağışıklık sisteminin önemli bir bileşeni olan kan hücrelerini üreten hematopoietik kök hücreler içerir. Femur ve tibia gibi daha büyük kemiklerden kemik iliği izolasyonu, yüksek hücre verimi sağlar.

Kemik iliğini toplamak için, ötenazi yapılmış bir fareyi sırtüstü pozisyona getirin ve cildi etanol kullanarak sterilize edin. Karın boşluğunu kesin ve arka bacakları ortaya çıkarmak için cildi çıkarın. Bacağın uzun bir kemiği olan tibiayı kırın ve fizyolojik koşulları korumak için soğuk PBS'ye yerleştirin. Diz kapağını yerinden çıkarın ve uyluk kemiği olan uyluk kemiğini ortaya çıkarmak için kasları çıkarın.

Femuru kemiğin altından kesin ve soğuk PBS'ye yerleştirin. Daha küçük hacimli bir mikrosantrifüj tüpüne bir delik açın ve her iki kemiği de kemiklerin açık ucu deliğe bakacak şekilde yerleştirin. Kemikleri içeren tüpü daha büyük hacimli bir mikrosantrifüj tüpüne yerleştirin ve kemik iliğini peletlemek için çift katmanlı tüpleri santrifüjleyin. Daha fazla analiz için hasat edilen kemik iliğini kullanın. Bu protokolde bir farenin arka bacaklarından kemik iliği alacağız.

- Kemik iliği hasadı için, 6 ila 10 haftalık bir C57 siyah-6 fareyi steril bir cerrahi ped üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve karın ve arka bacakları sterilize etmek için %70 etanol kullanın. Karın boşluğunu açmak için bir çift diseksiyon cerrahi makası kullanın ve arka bacakları ortaya çıkarmak için cildi çıkarın. Bir çift künt uçlu pansuman forseps kullanarak, fare tibiasını ayak bileğinin hemen altında tutun ve kaval kemiğini künt uçlu pansuman forsepslerinin altında stabilize etmek için bir çift kavisli pansuman forseps kullanın.

Tibiayı soğuk PBS'ye yerleştirmeden önce tibiayı kırmak ve kemiği açığa çıkarmak için kası çıkarmak için künt uçlu pansuman forsepslerini kullanın. Dengeleyici kavisli pansuman forsepslerini uyluk kemiğine doğru hareket ettirin ve diz kapağını tutmak için künt uçlu pansuman forsepslerini diz ekleminin altına kaydırın. Diz kapağını çıkarmak için yavaşça yukarı çekin ve uyluk kemiğini ortaya çıkarmak için kası diz kapağından çıkarın. Açıkta kalan uyluk kemiğini kavisli pansuman forsepslerinden tutun ve uyluk kemiğini kemiğin altından kesmek için cerrahi makas kullanın. Ardından, uyluk kemiğini PBS'ye yerleştirin.

Daha sonra, 0,5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpünde bir delik açmak için 18 gauge bir iğne kullanın ve her iki kemiği de kemiklerin açık uçları deliğe bakacak şekilde tüpe yerleştirin. 0,5 mililitrelik tüpü 1,7 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpüne yerleştirin ve çift katmanlı tüpleri bir mikrosantrifüjde döndürün. Santrifüjlemenin sonunda, kemik iliğinin tüpün dibine çıkarıldığını onaylayın.