T-Hücresi Zenginleştirme: Manyetik Ayırma ile Karışık Hücre Popülasyonundan T-Hücrelerini İzole Etme Tekniği

0 görüntüleme3:57 dk • April 30th, 2023

- Bir lenfosit sınıfı olan T hücreleri, enfeksiyonla mücadelede aktif rol oynar. Diğer birçok kan hücresi tipinin yanı sıra, immünokompetan T hücreleri fare dalağında ve lenf düğümlerinde bulunur. T hücrelerini seçici olarak izole etmek için, murin dalağı ve lenf düğümlerini toplayın ve bunları bir hücre süzgeci üzerinde yumuşatın. Tek hücreli bir süspansiyon elde etmek için dokuyu uygun bir ortamla yıkayın.

Kırmızı kan hücrelerini parçalamak için amonyum-klorür potasyum veya ACK tamponu ekleyin. Sağlam kan hücrelerini lizattan ayırmak için santrifüjleyin. Süpernatanı atın ve hücreleri uygun bir tamponda yeniden süspanse edin. Süspansiyonu, granülositler, B hücreleri, NK hücreleri ve kalan eritrositler gibi kan hücrelerini hedeflemek için biyotinile antifare antikorlarının bir karışımı ile tedavi edin. T hücreleri hedeflenmemiştir ve bu nedenle etiketlenmemiş olarak kalır.

Ardından, süspansiyona anti-biyotin manyetik mikro boncuklar ekleyin. Tüm biyotin etiketli hücreler mikro boncuklara bağlanır. Güçlü bir manyetik alanın etkisi altında tutulduğunda, manyetik olarak etiketlenmiş hücreler tüp duvarına yapışır. Etiketlenmemiş T hücreleri süspansiyon halinde kalır. Bağlanmamış zenginleştirilmiş T hücrelerini yeni bir toplama tüpüne toplayın. Aşağıdaki protokolde, manyetik bir ayırma tekniği kullanarak T hücrelerinin fare dalağı ve lenf düğümlerinden izolasyonunu gösteriyoruz.

- Lenf düğümlerini ve dalağı 40 mikrometrelik bir gözenek süzgecinde toplayın ve hücreleri serbest bırakmak için dokuları filtrelerden yumuşatmak için bir şırınga pistonu kullanın. Tüm hücreleri toplamak ve hücreleri santrifüjleme ile çökeltmek için süzgeci ve pistonu %1 FBS ile desteklenmiş RPMI ortamı ile yıkayın. Hücre peletine 5 mililitre ACK lizis tamponu ekleyin.

Oda sıcaklığında beş dakika sonra,% 1 FBS ile desteklenmiş 5 mililitre ortam ile reaksiyonu durdurun ve beyaz kan hücrelerini santrifüjleme ile peletleyin. Peletleri saymak için 5 mililitre MACS tamponunda yeniden süspanse edin ve hücreleri taze MACS tamponunda mikrolitre başına 2 kez 10 ila 8 hücre konsantrasyonuna seyreltin. 4 santigrat derecede 15 dakikalık bir inkübasyon için 6 hücreye 1 kez 10'da uygun konsantrasyonda anti-eritroid, anti-granülosit, anti-B-hücre ve anti-NK hücre tükenme antikorları ekleyin.

İnkübasyonun sonunda, hücreleri 10 milimetre buz gibi soğuk MACS tamponu ile yıkayın ve peleti taze MACS tamponunda mililitre başına 1 kez 10 ila 8 hücre konsantrasyonunda yeniden süspanse edin. Daha sonra, 4 santigrat derecede 15 dakikalık bir inkübasyon için karıştırarak 6 hücreye 1 kez 10'da 0.22 mikrolitre anti-biyotin mikro boncuk ekleyin.

İnkübasyonun sonunda, hücreleri 10 mililitre buz gibi soğuk MACS tamponu ile yıkayın ve standart boncuk izolasyon protokollerine göre MACS ekspres ayırıcı kullanarak manyetik boncuk ayırma ile bağlanmamış zenginleştirilmiş T hücrelerini toplayın. Ayırma işleminin sonunda, T hücrelerini santrifüjleme ile çökeltin ve peleti sayım için 5 mililitre taze MACS tamponunda yeniden süspanse edin.

10:24

Sitokin yakalama Sistemi kullanılarak Klinik Uygulamalar için Sitomegalovirüs özgü otomatik Hücre Zenginleştirme T hücreleri

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:39

CD4 yalıtım+ T-hücreleri ve T foliküler Yardımcısı (cTfh) hücre alt kümeleri üzerinden periferik kan kullanarak 6-renk Akış Sitometresi Analizi, dolaşan

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:28

Zenginleştirmek ve nadir antijen spesifik T hücreleri Manyetik Nano tanecikleri ile genişletin

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:41

Manyetik Olarak Aktive Edilmiş Hücre Sıralama: c-Kit Pozitif Hücreleri İzole Etmek İçin Bir Yöntem

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:32

Manyetik Aktive Hücre Sıralaması Kullanılarak CD31+ Endotelyal Öncü Hücrelerin Saflaştırılması

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:20

İzolasyon, tanımlama ve Murin Thymic Epitel Hücreleri saflaştırılması

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:38

LC-MS / MS kullanarak Kurutulmuş Kan Spotlar Immünosupresan Tacrolimus Niceleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:15

Tümör spesifik Endotel Hücreleri İzolasyon ve Kültürü Genişleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:33

İzolasyon ve

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:20

Manyetik aktif hücre stratejileri yalıtmak ve Sinovyal sıvı elde edilen mezenkimal kök hücre bir tavşan modelinden arındırmak için sıralama

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 29 Ağustos 2026