Kemik İliği Kaynaklı Dendritik Hücreler Üretimi: Fare Kemik İliğinden Dendritik Hücreler Üretme Yöntemi

- Dendritik hücreler veya DC'ler, T hücrelerini aktive eden anahtar antijen sunan hücrelerdir. Lösemik hastalarda, bu hücreler tümörle ilişkili antijeni zayıf bir şekilde eksprese eder ve antijene özgü bir immün yanıt ortaya çıkaramaz. Dendritik hücreler kemik iliğinde bol miktarda bulunur. Ve bu nedenle, kemik iliği, kanserdeki rollerini incelemeye yardımcı olmak için izolasyonları için tercih edilen bölgedir.

Dendritik hücreler elde etmek için, ötenazi yapılmış bir farenin uyluk kemiğinden veya tibia kemiğinden, temizlemek için medya dolu bir şırınga kullanarak kemik iliğini çıkarın. Eritrositleri parçalamak için peleti amonyum-klorür-potasyum veya ACK tamponunda santrifüjleyin ve yeniden süspanse edin. Şimdi lizis ve santrifüjü durdurmak için kültür ortamı ekleyin. Pelet, bir antibiyotik içeren kültür ortamında yeniden süspanse edilir. Granülosit-makrofaj koloni uyarıcı faktör veya GM-CSF ekleyin ve hücre süspansiyonunu bir Petri plakasına aktarın.

Plakayı istenen süre boyunca inkübe edin. GM-CSF, progenitör hücrelerin dendritik hücrelere farklılaşmasına yardımcı olur. Son olarak, hücreleri, dendritik hücrelerin yüzey reseptörüne bağlanan lipopolisakkaritler veya LPS ile aktive