JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:57 dk. • April 30th, 2023
- Transkripsiyon faktörleri, gen ekspresyonunu düzenlemek için DNA üzerindeki belirli bir bölgeye bağlanan proteinlerdir. Transkripsiyon faktörlerindeki hatalar bu aktiviteyi değiştirerek genlerin aşırı ekspresyonuna yol açar ve bu da kansere neden olur. Transkripsiyon faktörlerinin ve gen regülasyonunun rolünü anlamak için kromatin immünopresipitasyon testi veya CHIP gerçekleştirebiliriz ve kromatin kesme, CHIP iş akışında önemli bir adımdır.
Kromatin kesme için, formaldehit ekleyerek DNA-protein kompleksini stabilize edin. Formaldehit, kovalent bağlar oluşturarak proteinleri ilişkili DNA dizisine çapraz bağlar. Daha sonra, çapraz bağlı DNA-protein kompleksleri ve santrifüj içeren kromatini serbest bırakmak için hücreleri parçalamak için uygun bir lizis tamponu kullanın. Mikrokokal nükleaz enzimi kullanarak kromatini kesin. Bu enzim, nükleozomlar arasındaki kromatini parçalar ve gevşek DNA uçlarını sindirir. Karışımı santrifüjleyin ve süpernatanı toplayın.
DNA fragmanlarının uygun boyutunu analiz etmek için süpernatanı TBE agaroz jel üzerine yükleyin. Jel boyunca, negatif yüklü kromatin DNA'sının anoda doğru hareket etmesine neden olan bir elektrik alanı uygulayın. Daha küçük parç
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin