JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 6:29 dk. • April 30th, 2023
- Kromatin immünopresipitasyon veya ChIP, hücrelerdeki protein-DNA etkileşimlerini belirlemek için kullanılan bir tekniktir. Proteinler DNA üzerindeki belirli bölgelere bağlanır ve gen ekspresyonunu düzenler. İlk olarak, DNA-protein kompleksini formaldehit ile stabilize edin. Formaldehit, kovalent bağlar oluşturarak proteinleri ilişkili DNA dizisine çapraz bağlar.
Daha sonra, çapraz bağlı DNA-protein komplekslerini içeren kromatini serbest bırakmak için hücreleri parçalamak için uygun bir lizis tamponu kullanın. Süspansiyonu santrifüjleyin ve kromatin parçaları elde etmek için süpernatanı sonikleştirin. Daha sonra, numuneyi spesifik olarak DNA'ya bağlı proteine bağlanan uygun bir antikorla etiketleyin.
Numuneye özel manyetik boncuklar ekleyin. Boncuk antikoru tanır ve ona bağlanır. Antikor-protein-DNA kompleksi ile manyetik boncukları toplamak için bir mıknatıs kullanın. Bağlanmamış kromatin veya antikorları çıkarmak için numuneyi yıkayın. Komplekse yüksek tuz konsantrasyonlu bir tampon ekleyin ve DNA proteini çapraz bağlarını tersine çevirmek için daha yüksek sıcaklıklarda inkübe edin.
Bir mıknatıs kullanarak, DNA ve proteinleri içeren süpernatanı toplayın. Numunedeki proteinleri
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin