Manyetik Olarak Aktive Edilmiş Hücre Sıralama: c-Kit Pozitif Hücreleri İzole Etmek İçin Bir Yöntem
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:41 dk. • April 30th, 2023
- c-Kit veya CD117, kemik iliği ve kanda bulunan hematopoietik kök veya progenitör hücreler tarafından eksprese edilen bir tirozin kinaz transmembran reseptörüdür. Aynı zamanda akut miyeloid lösemiyi tespit etmek için bir belirteçtir.
C-Kit pozitif hücreleri izole etmek için, murin bacak kemiklerini toplayın ve iliği içeriden serbest bırakmak için ezin. Herhangi bir kemik parçasını çıkarmak için kemik iliği süspansiyonunu süzün. Kemik iliği hücreleri içeren süzüntüyü bir yoğunluk gradyan ortamı üzerine yerleştirin ve mononükleer hücreleri diğer fraksiyonlardan ayırmak için santrifüjleyin.
Mononükleer hücrelerin bulanık katmanını, anti-CD117 fare antikorlarına konjuge edilmiş mikro boncuklar içeren bir tüpte toplayın. Antikor-boncuk komplekslerinin c-Kit pozitif hücreler üzerindeki CD117 reseptörlerine bağlanması için inkübe edin. İnkübe edilmiş süspansiyonu manyetik bir alana yerleştirilmiş manyetik bir sütundan geçirin. Manyetik mikro boncuklarla etiketlenmiş tüm c-Kit pozitif hücreler sütunda kalırken, etiketlenmemiş hücreler geçer.
Sütunu manyetik alandan çıkarın ve c-Kit pozitif hücreleri elüte etmek için uygun bir tampon kullanarak içindekileri yıkayın. Aşağıdaki protokolde, t
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin