JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:59 dk. • April 30th, 2023
- Retrovirüsler, RNA genomlarını çift sarmallı DNA'ya dönüştürmek ve konakçı genomuna kalıcı olarak entegre olmak için ters transkriptaz kullanarak çoğalan RNA virüsleridir. Yeni viral parçacıklar hücreden çıkar ve diğer hücreleri enfekte edebilir. Kanser gen terapisi, mutasyona uğramış geni aşağı regüle etmek veya hücreleri ortadan kaldırmak için transdüksiyon adı verilen bir teknik yoluyla terapötik genleri hedef hücrelere sokmak için retroviral vektörler kullanır.
Yüksek titreli retroviral vektörler elde etmek için, HEK 293 hücrelerini, istenen retroviral plazmid, paketleme plazmidi ve uygun bir transfekte edici ajan içeren bir transfeksiyon karışımı ile transfekte edin. Hücreleri inkübe edin. Transfekte edici ajan, her iki plazmitin hücrelere verilmesini kolaylaştırır.
Retroviral plazmit, viral genomu hedef gen ile kodlarken, ambalaj plazmidi viral zarf proteinlerini kodlar. Paketleme hücrelerinin hücresel makineleri retroviral parçacıklar oluşturur ve bunları ortama bırakır. Hücreleri çıkarmak için viral süpernatanı toplayın ve santrifüjleyin.
Viral zarf proteinlerinin hücrelere bağlanmasını kolaylaştırmak için istenen viral partikül konsantrasyonunu ve kanser hücrelerini fibr
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin