Negatif İmmünomanyetik Seçim: Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinden B Hücrelerini Saflaştırmak İçin Bir Yöntem

0 views • 3:06 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Periferik kan mononükleer hücreleri veya PBMC'ler, B hücrelerini, T hücrelerini, doğal öldürücü veya NK hücrelerini ve monositleri içerir. B hücreleri, enfeksiyonla savaşmak için immünoglobulin molekülleri üretir. Lösemide bu hücreler çoğalır ve farklı organlara metastaz yapar.

B hücrelerini izole etmek için, izole edilmiş PBMC'lerin bir süspansiyonu ile başlayın. Farklılaşma kümesi veya CD adı verilen spesifik hücre yüzeyi moleküllerine yönelik birincil antikor karışımı ekleyin. Spesifik antikorlar, T hücreleri üzerindeki CD-3 molekülüne, monositler üzerindeki CD-14 molekülüne ve NK hücreleri üzerindeki CD-16 molekülüne bağlanır ve B hücrelerini etiketsiz bırakır.

Ardından, bağlanmamış antikorları çıkarmak için numuneyi yıkayın. Numuneye ikincil antikor konjuge manyetik mikro boncuklar ekleyin. İkincil antikorlar, spesifik hücrelere bağlı birincil antikorların FC bölgesine bağlanır. Etiketli hücre süspansiyonunu içeren tüpü bir manyetik alanın etkisi altına yerleştirin. Alanda, manyetik olarak etiketlenmiş hücreler göç eder ve tüp duvarına bağlanır, bu da istenmeyen hücrelerin negatif seçimine yol açar. Zenginleştirilmiş B hücreleri içeren süpernatanı yeni bir toplama tüpüne toplayın.

Bu protokolde, kronik lenfositik lösemi hastalarının PBMC'lerinden lösemik B hücrelerinin negatif immünmanyetik seçimi gerçekleştirilecektir.

Süpernatanı atın ve 10 milyon PBMC'yi, pH 7.4'e ayarlanmış olarak% 0.1 BSA ve 2 milimolar EDTA'ya sahip PBS olan bir mililitre izolasyon tamponunda yeniden süspanse edin. KLL lenfositlerinin artık PBMC preparatlarından saflaştırılması gerekmektedir. Daha sonra, 10 mikrogram fare monoklonal anti-CD-3, CD-14 ve CD-16 birincil antikorları ekleyin ve 4 santigrat derecede 30 dakika inkübe edin.

Hücreleri izolasyon tamponu ile yıkadıktan ve 4 santigrat derecede 5 dakika boyunca 500 kez g'de santrifüjledikten sonra, 10 mililitre izolasyon tamponunda 10 milyon PBMC'yi yeniden süspanse edin. Yeniden süspanse edilmiş hücreleri 100 mikrolitre yıkanmış manyetik boncuk ile 4 santigrat derecede 30 dakika boyunca nazikçe yeniden süspanse ederek inkübe edin. Ardından, tüpü iki dakika boyunca mıknatıs tutucuya yerleştirin ve süpernatanı bağlanmamış hücrelerle birlikte 5 mililitrelik bir pipetle yeni bir tüpe aktarın. Bu adımdan sonra saflaştırılmış KLL lenfositleri kullanıma hazırdır.

07:28

İzolasyon, Arıtma ve İşlevsel Araştırmalar ve Kabul edilmiş Transfer deneyler için Fare Kemik İliği Nötrofiller Etiketlenmesi

Related Videos

0 Views

09:25

Fenotip ve Fonksiyon Analizi için algılama ve Nadir zenginleştirilmesi antijene özgü B hücreleri

Related Videos

0 Views

09:13

Birincil İnsan Monositlerinin İzolasyon, Transfeksiyon ve Kültürü

Related Videos

0 Views

04:27

Monositlerin Tam Kandan İmmünomanyetik Negatif Seleksiyon ile İzolasyonu

Related Videos

0 Views

02:45

İnsan Buffy Paltolarından Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinin İzolasyonu

Related Videos

0 Views

03:58

İnsan Periferik Kanından B Hücrelerinin İzolasyonu ve Saflaştırılması

Related Videos

0 Views

14:06

Kordon Kanı gelen Prekürsör B-hücreli altkümeleri İzolasyonu

Related Videos

0 Views

08:26

İzolasyon, Farklılaşma ve Niceleme İnsan Kanı B Hücreleri Antikor salgılayan: ELISPOT Hümoral Bağışıklık bir Fonksiyonel Göstergesi'nin olarak

Related Videos

0 Views

08:08

İzolasyon ve murin lenfositlerin aktivasyonu

Related Videos

0 Views

09:08

Transkriptomik Profilleme için İnsan Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinin ve CD4 + T hücrelerinin Sézary Sendromu Hastalarından İzole Edilmesi

Related Videos

0 Views

Last updated: 25 July 2026