Hücre Dışı Pürin Metabolizması: Lösemik Hücrelerde Adenozin Üretimini ve Metabolizmasını Ölçmek İçin HPLC Tabanlı Bir Test

- Hücre dışı boşlukta nominal konsantrasyonlarda bulunan bir pürin nükleozit olan adenosin, fizyolojik koşullar altında hücre proliferasyonunu kontrol etmeye yardımcı olur. Lösemi gibi patolojik durumlar sırasında, hücre dışı adenozin konsantrasyonu artar ve kanser hücrelerine karşı bağışıklık tepkilerini inhibe eder. Adenozin birikimi, ATP veya ADP nükleotid defosforilasyonundan veya adenosinin inosin nükleozitine bozulmuş bozunmasından kaynaklanır.

Adenozin üretimini ve tüketimini ölçmek için, bir nükleotid substratı varlığında kanser hücrelerini kültürleyin. Hücrelerin adenozin metabolik aktivitesi, kültür içinde bulunan çeşitli pürin moleküllerinin konsantrasyonlarını belirler. Hücreleri çıkarmak ve süpernatantta pürin molekülleri elde etmek için santrifüjleyin.

Pürinleri ayırmak ve miktarını belirlemek için numuneyi uygun şişelere aktarın. Bunları, hidrofobik ligandlarla hareketsiz hale getirilmiş sabit bir faz içeren ters fazlı bir faza, yüksek performanslı sıvı kromatografisine veya RP-HPLC kolonuna yükleyin. Kolondan geçerken, hidrofobik moleküller ligandlara adsorbe olur ve hidrofobikliklerine bağlı olarak tutulur. En az hidrofobik moleküller önce dışarı akarken, daha hidr