JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:31 dk. • April 30th, 2023
- Tümörler için kemoterapötik tedavi genellikle yüksek oranda proliferatif hücreleri hedef alır ve kök hücre popülasyonunun küçük bir alt kümesini geride bırakarak tümörün yeniden kapsüllenmesine yol açar. Bu kök hücrelere yan popülasyon denir. Yan popülasyon spesifik hücre belirteçlerinden yoksun olduğundan, onları diğer tümör hücrelerinden izole etmek için bir boya akış testi kullanıyoruz.
Başlamak için, izole edilmiş zebra balığı tümör hücrelerine Hoechst boyası ekleyin. Hoechst çekirdeğe girer ve DNA'nın küçük oluğundaki A-T açısından zengin bölgeye bağlanır. Hücrelerin yan popülasyonu, yüzeyde daha yüksek bir ABC taşıyıcı konsantrasyonuna sahiptir, bu da boyanın hücre dışına hızlı bir şekilde akmasına ve düşük floresan göstermesine neden olur.
Hoesct ile tedavi edilmiş tümör hücrelerinin başka bir şişesini alın ve buna verapamil ekleyin. Bu flakon bir kontrol görevi görür, çünkü verapamil ABC taşıyıcılarını bloke ederek hoechst akışında bir azalmaya neden olur, bu nedenle yan popülasyonda floresan artar.
Hem kontrol hem de numune hücrelerini karanlıkta inkübe edin. Daha sonra, yalnızca ölü hücrelerin çekirdeğine giren ve DNA bazları arasında ara tabaka oluşturan ve ölü hücrele
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin