JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:02 dk. • April 30th, 2023
- Deneysel kanser fare modellerinde, hayvanda indüklenen kanser, fenotip olarak insan kanserine benzer. Potansiyel tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için verimli bir platform sağlarlar. İki aşamalı bir cilt karsinogenezi modelini indüklemek için, önce yüzüstü pozisyonda bağışıklığı baskılanmış anestezi uygulanmış bir fare hazırlayın. Altta yatan cildi ortaya çıkarmak için kürkünü tıraş edin. İlk adımda, açıkta kalan sırt derisine güçlü bir tümör başlatıcı ajan uygulayın.
Dinlenme veya telojen fazındaki bu saç folikülleri, aktif olmayan yağ bezlerini barındırır. Ortaya çıkan sebum akışı eksikliği, bu saç folikülleri içinde bileşiğin birikmesine izin verir. Bileşik, çevredeki hücrelere yayılır ve esas olarak saç folikülü kök hücrelerinde veya birincil keratinosit kök hücrelerinde hedef gen mutasyonunu indükler. Değişmiş gen ekspresyonu bu hücrelerde tümör başlangıcına neden olur.
İkinci adımda, dorsal cilde istenen zaman aralıklarında tekrar tekrar uygun bir tümör büyümesini teşvik edici ajan uygulayın. Kimyasal, başlatılan hücre popülasyonunun genişlemesini uyarır. Devam eden hücre proliferasyonu, papillom adı verilen kanserojen büyümelerin oluşumuna yol açar.
Aşağıdaki protokolde, bir mutajen olan DMBA ve büyümeyi teşvik eden bir ajan olan TPA kimyasallarını kullanarak iki aşamalı bir cilt karsinogenezi fare modelinin oluşturulmasını gösteriyoruz.
- Deneye başlamadan önce, kavga ve cilt lezyonlarını önlemek için agresif 7 ila 9 haftalık fareleri ayrı kafeslerde barındırın. Deri papilloma indüksiyonu için önce deney hayvanlarının sırt derilerini tıraş edin ve fareleri ayrı ayrı tartın. Tıraştan kırk sekiz saat sonra, anestezi uygulanmış her farenin traşlı bölgesine 200 mikrolitre asetonda 50 mikrogram DMBA uygulamak için bir pipet kullanın.
Cilt papilloma teşviki için, DMBA uygulamasından yedi gün sonra, deneyin sonuna kadar haftada iki kez 200 mikrolitre asetonda 5 mikrogram TPA ile cildi tedavi edin. Hayvanları papillomalar için inceleyin ve her bir papillomun boyutunu her hafta bir harita üzerinde fotoğraflayın ve kaydedin.
Çapı 1 milimetreden daha büyük ele gelen bir kitle, bir haftadan uzun kalırsa papilloma olarak kabul edilir.