Bir, Enjeksiyon. stephensi Embriyolar Sıtma dayanıklı Sivrisinekler oluşturun

Dünyada her 15 saniyede bir, James laboratuvarında sıtmadan ölen bir çocuk var ya da sıtma insanlarını taşıyamayan Fransız sivrisinekleri yapmaya çalışıyor. Benim adım TIUs. Universal of California Irvine'de Moleküler Biyoloji ve Biyokimya Bölümü'nde Anthony James'in laboratuvarındayım.

Bugün size Stevens gözünün değil transgenik yapmayı göstereceğim. Ve bunu sıtma sivrisineklerini dirençli hale getirmek için yapıyoruz, böylece sıtma parazitini taşıyamazlar. Şimdi sivrisineklerin yumurtalarını bırakacakları İzotonik tamponlu bir şişe hazırladım.

Bu aspiratörü sivrisinekleri emmek ve bir şişeye koymak için kullanacağım. Bu şişe daha sonra 30 santigrat derece olan bir inkübatöre giriyor ve bir fincanda yaklaşık bir saat bekleteceğiz. Şimdi mikroenjeksiyon iğnelerini çekeceğiz.

Bunlar kuvarstan yapılmış iğneler ve çok ince bir uç kullanmamız gerekiyor. Bu nedenle, bu iğne çektirmesine ihtiyacımız var. Suter enstrümanlarından bir iğne çektirme ve ayrıca SU enstrümanlarında ince iğneler kullanıyoruz.

Şimdi sivrisinekleri dışarı çıkarıyorum, ve bu yumurtaları Petri kabına koyacağım, burada izotonik tampona batırılmış bir filtre kağıdım var, bu sadece enjeksiyon süresi boyunca embriyoları ıslak tutmak için. Filtre kağıdındaki su miktarı kritiktir. Yumurtaların etrafta yüzmesini ve kurumasını istemezsiniz.

Şimdi embriyoyu yumurta kağıdından izotonik tampona batırılmış başka bir üç MM watman kağıdına taşıyacağım. Şimdi bunu, mikroenjeksiyon için hizalamadan önce Corian'ı çıkarmak için yapın. Şimdi Corian'ı alacağım, yumurtaların üzerindeki gümüşi yüzey.

Ve bunu onları fırçamla fırçalayarak yapıyorum. Üstte, Corian'ın hala oturduğu bir embriyo var ve gümüşi parlayan bir kısımları var. Aşağıdaki nerede?

Corian'ı çıkarmayı başardım ve bu üstteki muhtemelen bir bantta kayacak, alttaki ise yapışacak. Ve eşit olmayan bir taraf yaptığınızda önemli olan da budur. Şimdi embriyoları hizalıyorum.

Embriyolar ön uçta faktör veya daha büyük ve ben onu sağa yerleştiriyorum. Solda, daha ince olan ve embriyoları enjekte edeceğim poster ucum var. Onları bir araya getirmeye çalışıyorum, böylece pozisyonlarını korumak için birbirlerine yardımcı oluyorlar.

Ve genellikle bir satırda yaklaşık 10 tane yaparım. Şimdi elimde bir çizgi var, embriyolar ve onları bir kapak fişine aktaracağım. Kapak fişi üzerinde.

Yapışmaları için peruk bandı koydum. Bunu bitirdiğimde, embriyoların oturduğu filtre kağıdını başka bir filtre kağıdı ile kurutacağım, embriyoları kapak fişine koyacağım ve yağ uygulamadan önce 30 saniye kurumasını bekleyeceğim. Şimdi embriyoları hizaladık ve onları yağın altına koyduk.

Mikroskop aşamasında, mikrop deseninin bu özel ucunu kullanarak gıda boyası ile karıştırılmış DNA'yı enjekte edeceğiz ve bunu portun iğnelerine enjekte edeceğiz. Şimdi iğneyi doldurduk ve tekrar bir mikro enjektöre koyduk. Ve şimdi mikro enjeksiyonları yapmaya hazırız.

Şimdi onu keskinleştirmek için iğneyi hareket ettiriyorum ve odaklandığını görebiliyorum. Bu yapıldıktan sonra, bir ağırlık iğnesini hareket ettiriyorum ve embriyoları hareket ettiriyorum ve onları da odaklıyorum. Ve bu yapıldığında, iğneyi yerine oturana kadar tekrar hareket ettiriyorum ve embriyolarım üzerinde hareket ediyorum.

Şimdi iğne yağın içinden geçtiğinde bulanıklaşıyor ve tekrar ayarlamanız gerekiyor. Yani bu tam olarak köpekbalığı. Kesinlikle, köpekbalığı kene.

Ve şimdi enjeksiyonları yapmaya hazırım. Embriyoya iğne ile dokunduğumu ve bunu yaparak ucunu kırdığımı ve embriyoya enjekte edilecek küçük bir damlacığın çıktığını görebilirsiniz. Yani burada enjekte edin ve tekrar çıkarın.

Ve her embriyo arasında iğnenin ucuna küçük bir damlacık çıkıp çıkmadığını her seferinde kontrol ediyorum. Ve gördüğünüz gibi, her embriyonun mükemmel pozisyona gelmesi için yeniden ayarlamam gerekiyor. Şimdi bu sızıyordu.

Gördüğünüz gibi, yağa ikinci enjeksiyonumu yaptığımda kabarcık çok büyük oluyor ve mikro enjektörün basıncını yeniden ayarlamam gerekiyor. Şimdi mikro enjeksiyonları bitirdik ve embriyoları mikroskoptan izotonik tamponla doldurduğumuz Petri kabına taşıyacağız. Kapak fişindeki yağı sileceğim ve küçük bir parçaya keseceğim ve bunu Petri kabına koyacağım.

Şimdi onları gün sonuna ve oda sıcaklığına kadar burada bırakacağız. Ve sonra onları sektöre doğru aşağı taşıyoruz. Bugün size nasıl korkunç bir Steven tarafı enjekte edeceğinizi gösterdim Geçici sivrisinekler yapmak için.

Ve şimdi sadece larvaların yumurtadan çıkmasını beklemek zorundayız, tüm larvaların yumurtadan çıkmasını bekliyoruz. Yetişkinlere getireceğiz ve sonra çiftleşecekler. Ve bundan sonra, Refactor olup olmadıklarını bir ekrana başlatabilmemiz için üç haftamız olacak.