Name: Yüksek çözünürlüklü Fiber-optik Mikroendoskopi In situ Hücresel Görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-01-11T22:01:00.000+00:00
Duration: 13 min 49 s
Description: Keşfedin düşük maliyetli fiber-optik mikroendoskop kurulumunu, canlı hücre görüntüleme için 5.000 doların altında maliyetle bir günde tamamlanabilir. Bu yöntem, in vitro, in vivo ve insan deneklerinde gerçek zamanlı hücresel detayları gözlemlemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma, kısmen Ulusal Sağlık Enstitüleri, hibe R01 EB007594, Savunma Meme Kanseri Araştırma Programı Bölümü, öneri BCO74699P7 ve Susan G. Komen Vakfı Hibe 26152/98188972 tarafından finanse edildi.

1. Mikroendoskopa Meclisi Burada açıklanan (şekil 1a) yüksek çözünürlüklü mikroendoskop montaj ve uygulama mümkün çeşitli varyasyonlar ile bir temel yapılandırma olarak kabul edilmelidir. Biz burada ayrıntılı platform floresan bir kontrast madde olarak proflavine ile birlikte kullanılmak üzere tasarlanmış bir somut bir şekilde açıklamaktadır. Proflavine parlak bir nükleer sırasıyla 445 nm ve 515 nm absorpsiyon ve emisyon dalga boylarında pik ile leke. Diğer kontrast ajanların kullanımı, kullanıcı uyarma, emisyon ve dikroik filtreleri uygun seçmek için gerekecektir. Yüksek çözünürlüklü mikroendoskop çeşitli unsurları genel ve birden çok tedarikçiden temin edilebilir. Örneğin, optomechanical konumlandırma bileşenleri, diğerleri arasında Thorlabs, Newport, Linos mevcuttur. Kompakt CCD kameralar Point Gri Araştırma, Prosilica ve Retiga dahil şirketler mevcuttur; kamera hassasiyeti kullanılmak üzere fluorofor parlaklık yanı sıra istenilen kare hızı dikkate alınarak seçilmelidir. Yüksek güçlü ışık yayan diyot (LED), diğerlerinin yanı sıra Luxeon, Cree, Nichia elde edilebilir. Fiber-optik demetleri, Sumitomo, Fujikura ve Schott mevcuttur. Belirli bir uygulama için bileşenler seçerken, kullanıcı, aydınlatma yoğunluğu, kamera hassasiyeti, kazanç ve maruz kalma süresi photobleaching, floresan mikroskopi fluorofor konsantrasyonu arasında yer doğasında olan ilişkileri göz önünde bulundurmalıdır. <ol><li> 7.5 bir çift oluşturmak için, kafes çubukları "1.5 kafes çubukları" 6 Bağlan "uzun çubuklar kat ayna ünitesi biri yüzüne bu çubuklar Vidalı 0.5 Vida" çubuklar ters yüzüne. Deliklerden düşük iki üzerinden, kafes kafes çubuklar üzerine küp kaydırın. Kafes küp (Şekil 1b) yan yüzüne 2 "çubuklar vidalayın. </li><li> C-mount SM1 adaptörü kullanarak bir kafes plaka kamera takın. 0.5 "kafes çubuklar kafes plaka Güvenli, yüz kat ayna ünitesi ile yıkayın. </li><li> 3 "uzun objektif tüp içine yerleştirin ve" boru "lens lens istinat halka ile güvenli. Öngörülen zaman lensin odak uzaklığı fiber-optik paket çekirdek, en az iki piksel numune böyle seçilmelidir kamera üzerine, filtre üreticisi tarafından belirtilen yan içine lens tüp Vida ilk istinat halka üstüne tüpe Bırak emisyon filtresi ve filtre güvence altına almak için başka bir halka eklemek filtre yönlendirme kuralını dikkate alınmalıdır. kafes küp CCD kamera yakın Şekil 1c, bu objektif ve filtre netlik için 3 "objektif tüpü olmadan gösterilmiştir. </li><li> Kamerayı bir bilgisayara bağlayın ve ekrandaki görüntüyü. Doğrudan uzak bir nesneye kafesinin montaj ve raylar boyunca kafes küp bir görüntü odak görünene kadar kaydırın. Bu yerde kafes küp kilitleyin. (Bu sonsuza düzeltilmiş objektif lens ile kombine edildiğinde tüp lens odaklanmış bir görüntü oluşturacaktır sağlanması basit bir yöntem). </li><li> Dikroik ayna kafes küp 45 ° 'de yer tutucu ve içine yerleştirin. </li><li> Tüp lens sahibinin karşısında kafes küp yüzüne, SM1 konu adaptörü RMS ve ayarlanabilir bir objektif tüpü ile, objektif lens vidalayın. A z-çevirmen, kolay odaklama için ayarlanabilir lens tüp yerine kullanılan olabilir. Bir kafes plaka içine bir SMA konnektör Vida ve yaklaşık objektif lens çalışma mesafesi, çubuklar bu monte. </li><li> Dağı bir 2 ucuna bir kafes plaka ve slayt LED "çubuklar bir lens, 0.5" bu tüp kafes küpün yan vidalanıyor olduğunda, LED bir görüntü oluşturacak şekilde lens tüp objektif lens arka diyafram doldurur. Bu (Kohler aydınlatma) yapılandırma fiber optik demet proksimal yüzü düzgün aydınlatılmış olmasını sağlayacaktır. 0.5 "objektif tüp eksitasyon filtresi ekleyin ve istinat halkası (Şekil 1c) ile güvenli. </li><li> SMA konnektör, fiber-optik paket takın. SMA Konnektörlü paket kafes çubuklar üzerine monte SMA yuvasına vidalayın. Doğrudan paket distal ucunu geniş bantlı bir ışık kaynağı (floresan aydınlatma yeterli olacaktır) doğru ve CCD kamera paket proksimal yüz görüntü gözlemleyebilirsiniz. Elyaf demeti görüntüsü odak görünene kadar kafes küp vidalama veya objektif lens pozisyonu ayarlayın. Bireysel çekirdek (Şekil 2) açıkça görülebilir olmalıdır. </li></ol> 2. GRIN Lens montaj Mikroendoskop mekansal çözünürlükte bir mikro lens veya lens montaj elyaf demeti ucuna takarak artırılabilir. Bu optik ve böylece ışık-guid dayattığı uzamsal örnekleme frekansı artan doğrudan doku demeti ucu yerleştirme yerine, ucu demagnification ile doku yüzeyine imaged olduğu gibi yapılandırılmışelyaf demeti ing çekirdek. Demagnification derecesi orantılı bir alan görünümünde azalma mekansal çözünürlükte ve aynı zamanda artış, karşılık gelir. Gradient indeksi (GRIN) lens bileşenleri, fiber optik ile uyumlu ve diğerleri arasında GrinTech, NSG, Schott, mevcuttur, ve doğrudan bir elyaf demeti ucuna bağlanmış olabilir. <ol><li> Uygulamanız için istenen büyütme ve çalışma mesafesi ile GRIN objektif seçin. Objektif çapı ile çalışmayı planlıyoruz elyaf demeti daha fazla olduğundan emin olun. Biz elyaf demeti ve GRIN objektif bağı önce doğru uyum için düşük güçlü bir mikroskop veya Stereoskop altında, 3-eksen ayrı manuel konumlandırma aşamaları üzerine monte edilmesi önerilir. </li><li> Lens veya paket yüz ya da bir damla optik yapıştırıcı (örn. Norland UV yapıştırıcı) yerleştirin. Manuel pozisyoner ile temas iki bileşenden getirin. Üretici tarafından önerilen doz UV ışık arabirimi göstermelidir. </li><li> GRIN lens ve gümrüklü arayüzü, alüminyum kapiller tüp (Küçük Parça A.Ş.) kısa bir uzunluğu korumak için eklem içine kullanılabilir. Epoksi ile ortak ve güvenli üzerinden boru kaydırın. Isı shrink boru montaj bitirmek için kullanılabilir. </li></ol> 3. Mikroendoskopa Görüntüleme <ol><li> Yansıması veya doku hücreleri kontrast madde uygulayın. Proflavine (0.01 PBS içinde% w / v) ile in vitro kültür hücreleri görüntülemede kısa inkübasyon (&lt;1 dakika) ve kapsamlı durulama yapılabilir. Görüntüleme, ex vivo doku örneklerinin ya da in vivo dokularda boya mümkün aşağıdaki topikal uygulama. Proflavine alımını bu koşullar altında, bir kaç saniye ve birkaç dakika süren içinde mümkün görüntüleme, yakın anlık olarak tespit edilmiştir. </li><li> Fiber optik demet ışık yansıması için örnek ile temas halinde yerleştirin. Kültür veya ex vivo doku örnekleri görüntüleme hücreleri, görüntüleme sırasında istikrar için XYZ eksenleri manuel konumlandırma aşamaları ile güvenli bir fikstür elyaf demeti distal ucu montaj önerilir. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar: Doğru monte edildiğinde mikroendoskop, epi-floresan mikroskop, tutarlı bir fiber-optik paket üzerinden geçirilmesine olarak çalışacak. , En iyi görüntüleme sonuçları için üç temel koşulların yerine getirilmesini sağlamak için, dikkat dikkat edilmelidir: <ol><li> Sistemin tam çözünürlükte elde etmek için, lif demeti proksimal yüz bulanıklaştırma olmadan CCD kamera üzerine imaged olmalıdır. Şekil 2a, b, c, sırasıyla, yoksul odaklı görüntülü bir elyaf demeti kısmı, hafif bulanıklaştırma, ve iyi bir odak göstermektedir. Paket yüze göre objektif lens eksenel pozisyonunu ayarlayarak optimum odak bulundu. </li><li> Elyaf demeti proksimal yüzü düzgün tam çapı (alan görüş) üzerinden aydınlatılmış olmalıdır. Protokol Metin (1.7) de açıklandığı üzere, bu Kohler aydınlatma aydınlatma optik yapılandırarak elde edilir. Şekil 2d düzgün bir floresan örnek kritik aydınlatma altında ilgili sonuç gösteren Şekil 2e, bu tercih yapılandırmasında aydınlatılmış kazanılmış bir görüntü gösterir. İkinci durumda, LED yapısı, gerçek bir örnek yapısı üzerine bindirilmiş bu istenmeyen desen görünüm elyaf demeti yüzüne görüntülü. </li><li> Elyaf demeti proksimal ve distal yüzleri Her iki temiz ve çizik ve cips ücretsiz olmalıdır. Şekil 2f fiber çevre 05:00 küçük bir çip şeklinde hasar, paket yüz bağlı enkaz varlığını göstermektedir. Enkaz lens kağıt ve izopropanol, ya da standart fiber-optik temizleme araçları, geleneksel fiber optik konektörler gibi aynı şekilde temizlik yüzleri paket kaldırılabilir. Elyaf demeti her iki ucunda çizik veya yontulmuş, ya da paket uzunluğu boyunca bozulursa, yüz standart manuel veya mekanik parlatma teknikleri ile düz cilalı olabilir ise. 0.5-1.0 mikron kağıt üzerinde son bir cila ile, ilk bir kaba lehçe için kağıt alıştırma 12-15 mikron önerilir. </li></ol> Şekil 3a, etiketleme aşağıdaki örnek üzerinde çıplak elyaf demeti proflavine ve ışık yerleştirme, 1483 hücreleri in vitro görüntüleme göstermektedir . Şekil 3b mekansal çözünürlükte ve paket ucuna bağlanmış bir 2.5x GRIN lens tarafından sağlanan alan görüş azalma iyileşme göstermektedir. Film 1 meme yağ yastığı bir fare modelinde in vivo görüntüleme göstermektedir. Burada, 21-gauge iğne ile 0.5 mm dış çapı (330 mikron alan-view) ile bir elyaf demeti geçti ve doku içine gelişmiş. Yağ hücreleri, 15 yaşında bu satın alma belirgin kalp döngüsü nedeniyle hareket ile, açıkça görülebilir.saniye başına kare. Şekil 3c, sağlıklı bir insan gönüllü olarak oral mukoza görüntüleme, 1.5 mm dış çapı (1.4 mm alan görüş) kullanarak bu kez daha büyük bir elyaf demeti göstermektedir. Gösterilen tüm örnekler, proflavine nükleer bir etiketleme floresan kontrast madde olarak kullanılmıştır. <img src="/files/ftp_upload/2306/2306fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 yüksek çözünürlüklü mikroendoskop (HRME) birleştirmek. (A) HRME sisteminin şematik diyagramı. (B) Meclis ana optomechanical destek yapısı. (C) optik elemanlar eklenmesi, LED aydınlatma ve CCD kamera. 10 "x 8" x 2.5 "muhafaza paketlenmiş HRME sistemi (d) Fotoğraf,. <img src="/files/ftp_upload/2306/2306fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 HRME ayarlama. (A) yoksul odak fiber-optik paket ile görüntüleme örnekleri, (b) iyi bir odak yakın, (c) ideal bir odak. (D), paket distal ucunda tek tip bir floresan hedef Kohler (uniform) aydınlatma altında görüntülenmiş. (E) tek tip bir floresan hedef nesne üzerinde belirgin kaynak yapısı ile, kritik bir aydınlatma altında görüntülenmiş. (F) gevşek doku ve hücrelerin, aynı zamanda kendi çevresindeki ufak çaplı hasara yatkın elyaf demeti yüz, sopa olabilir. <img src="/files/ftp_upload/2306/2306fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3 HRME ile Görüntüleme. (A) 1483 hücreleri, in vitro proflavine% 0,01 (w / v) ile etiketleme aşağıdaki çıplak fiber paket (IGN-08/30) ile görüntülenmiş. (B) 'de gösterildiği gibi aynı 1483 hücre kültürü (a), 2.5x GRIN lens takılı bir lif demeti ile görüntülenmiş. Proflavine% 0.01 'lik topikal uygulaması (w / v) aşağıdaki (c), in vivo olarak normal insan oral mukoza Görüntü, . Film 1 Görüntüleme meme dokusu içine geçirilen bir 21-gauge iğne lümeni içinde 450 mikron dış çapı elyaf demeti ekleme ile bir fare yağ yastığı. Proflavine% 0,01 (w / v) görüntüleme fiber yerleştirilmesinden önce, aynı iğne ile görüntüleme siteye teslim edildi <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/2306/5-11-1%202306_Pierce_movie1.avi">. videosunu izlemek için</a> tıklayın

<ol><li>Pierce, M. C., Javier, D. J., Richards-Kortum, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+contrast+agents+and+imaging+systems+for+detection+and+diagnosis+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Optical contrast agents and imaging systems for detection and diagnosis of cancer.</a> Int. J. Cancer. 123, 1979-1990 (2008).</li>
<li>Muldoon, T. J., Pierce, M. C., Nida, D. L., Williams, M. D., Gillenwater, A., Richards-Kortum, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcellular-resolution+molecular+imaging+within+living+tissue+by+fiber+microendoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Opt.+Express%22%5BJournal%5D)">Subcellular-resolution molecular imaging within living tissue by fiber microendoscopy.</a> Opt. Express. 15, 16413-16423 (2007).</li>
<li>Muldoon, T. J., Anandasabapathy, S., Maru, D., Richards-Kortum, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+imaging+in+Barrett%27s+esophagus%3A+a+novel%2C+low-cost+endoscopic+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Gastrointest.+Endosc%22%5BJournal%5D)">High-resolution imaging in Barrett's esophagus: a novel, low-cost endoscopic microscope.</a> Gastrointest. Endosc. 68, 737-744 (2008).</li>
<li>Muldoon, T. J., Thekkek, N., Roblyer, D., Maru, D., Harpaz, N., Potack, J., Anandasabapathy, S., Richards-Kortum, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+quantitative+image+analysis+criteria+for+the+high-resolution+microendoscopic+detection+of+neoplasia+in+Barrett%27s+esophagus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Opt%22%5BJournal%5D)">Evaluation of quantitative image analysis criteria for the high-resolution microendoscopic detection of neoplasia in Barrett's esophagus.</a> J. Biomed. Opt. 15, 026027-026027 (2010).</li>
<li>Zhong, W., Celli, J. P., Rizvi, I., Mai, Z., Spring, B. Q., Yun, S. H., Hasan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+high-resolution+fluorescence+microendoscopy+for+ovarian+cancer+detection+and+treatment+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">In vivo high-resolution fluorescence microendoscopy for ovarian cancer detection and treatment monitoring.</a> Br. J. Cancer. 101, 2015-2022 (2009).</li>
<li>Dubaj, V., Mazzolini, A., Wood, A., Harris, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optic+fibre+bundle+contact+imaging+probe+employing+a+laser+scanning+confocal+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microsc%22%5BJournal%5D)">Optic fibre bundle contact imaging probe employing a laser scanning confocal microscope.</a> J. Microsc. 207, 108-117 (2002).</li>
<li>Dromard, T., Ravaine, V., Ravaine, S., Lévêque, J. -L., Sojic, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remote+in+vivo+imaging+of+human+skin+corneocytes+by+means+of+an+optical+fiber+bundle%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Sci.+Inst%22%5BJournal%5D)">Remote in vivo imaging of human skin corneocytes by means of an optical fiber bundle.</a> Rev. Sci. Inst. 78, 053709-05 (2007).</li>
<li>Udovich, J. A., Kirkpatrick, N. D., Kano, A., Tanbakuchi, A., Utzinger, U., Gmitro, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral+background+and+transmission+characteristics+of+fiber+optic+imaging+bundles%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Opt%22%5BJournal%5D)">Spectral background and transmission characteristics of fiber optic imaging bundles.</a> Appl. Opt. 47, 4560-4568 (2008).</li>
<li>Barretto, R. P. J., Messerschmidt, B., Schnitzer, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+fluorescence+imaging+with+high-resolution+microlenses%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">In vivo fluorescence imaging with high-resolution microlenses.</a> Nat. Methods. 6, 511-512 (2009).</li>
<li>Rouse, A. R., Kano, A., Udovich, J. A., Kroto, S. M., Gmitro, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+demonstration+of+a+miniature+catheter+for+a+confocal+microendoscope%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Opt%22%5BJournal%5D)">Design and demonstration of a miniature catheter for a confocal microendoscope.</a> Appl. Opt. 43, 5763-5771 (2004).</li>
<li>Kester, R. T., Christenson, T., Richards-Kortum, R., Tkaczyk, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+cost%2C+high+performance%2C+self-aligning+miniature+optical+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Opt%22%5BJournal%5D)">Low cost, high performance, self-aligning miniature optical systems.</a> Appl. Opt. 48, 3375-3384 (2009).</li>
</ol>

MP ve DY ifşa etmek için bir şey var. RRK microendoscopic görüntüleme platformları ile ilgili patent sahibidir.

Yüksek çözünürlüklü mikroendoskopi tekniği, in situ hücresel detay görselleştirmek için, esnek, sağlam ve maliyet-etkin yöntemi ile temel biyomedikal ve klinik araştırma alanlarında araştırmacılar sağlar nitelendirdi. Görüntüleme sistemi montaj için bir protokol açıklanan ve in vitro hücre kültürü kullanımını gösterdi, ve in vivo hayvan ve insan dokuları var. Burada sunulan görüntüleme sonuçları floresan bir kontrast madde olarak kullanılan proflavine ederken, diğer gruplar, LED aydınlatma dalga boylarında ve filtreler ile 5-7 diğer boyaların uyarma / emisyon spektrumları maç için seçilen sistemi sürümleri göstermiştir . Çözünürlük ve görüş alanında başlangıçta çekirdek-çekirdek aralığı ve fiber-optik paket görüntüleme çapı belirlenir. Biz yaklaşık 4 mikron çekirdek çekirdek aralığı ve 330 mikron (1 film), 720 mm (Şekil 2, Şekil 3a, b), 1400 mm (Şekil 3c) görüntüleme çapı demetleri kullanılır. Küçük demetleri dar göstergesi iğne geçirilir ve büyük liflerin önemli ölçüde daha esnek olabilir. Biz ve diğerleri 8, bazı durumlarda, fiber otofloresans emisyonlarının görünümünü kendisi paket kaydetti. UV dalga boylarında fluorophores heyecanlandırmak, ya da kırmızı spektral aralıkta emisyon toplamak için çalışırken, dikkat elyaf demeti otofloresans genel ölçülen sinyal katkıda düzeyine dikkat edilmelidir. Yüksek çözünürlüklü mikroendoskopi işin en güncel çıplak bir elyaf demeti kullanılır bildirilmiş olmasına rağmen, ek büyütme distal ucuna bağlanmış GRIN lenslerin kullanımı ile sağlanabilir. GRIN lensler, optik sapmaları ve sınırlı NA duyarlılık iyi tanınan olmasına rağmen, mekansal çözünürlüğü artırmak için basit ve ekonomik şekilde sunuyoruz. GRIN objektif performansı belirli bir uygulama, hibrid GRIN / küresel lens hedefleri 9 veya minyatür objektif lens meclisleri için yetersiz ise 10-11 istihdam edilebilir. Yüksek çözünürlüklü mikroendoskop geniş bir alan epi-floresan mikroskop gibi çalışır aslında burada açıklandığı, bu nedenle herhangi bir optik kesit (konfokal veya doğrusal olmayan mikroskopi) beklenebilir. Bizim tecrübelerimize göre 455 nm uyarma ışık ve kontrast madde olarak topikal proflavine kullanarak, ışık, öncelikle bir kaç hücre tabakaları ile ilgili bir derinlik toplanır. Bu protokol, 10 kompakt bir ayak izi okuyucu ile, masa üstü &quot;x 8&quot; yüksek çözünürlüklü mikroendoskop monte sağlamak için gereken. Eğer istenirse, sistem bir kutu içinde kapalı ve elektrik bileşenleri (LED ve kamera) bir pil (Şekil 1d) tarafından desteklenmektedir. Birçok kompakt fotoğraf makineleri, IEEE-1394 (Firewire) ve ana bilgisayar USB portu tarafından desteklenmektedir.

<table><tbody><tr><td>CCD kamera</td><td>Point Grey Research</td><td>GRAS-14S5M</td><td></td></tr><tr><td>LED</td><td>Thorlabs Inc.</td><td>M455L2</td><td>Proflavine ile kullanım için seçilmiştir &amp;#8211; diğer floroforlar farklı parçalar gerektirebilir</td></tr><tr><td>Eksitasyon filtresi</td><td>Semrock</td><td>452/45</td><td>Proflavine ile kullanım için seçilmiştir &amp;#8211; diğer floroforlar farklı parçalar gerektirebilir</td></tr><tr><td>Emisyon filtresi</td><td>Semrock</td><td>550/88</td><td>Proflavine ile kullanım için seçilmiştir &amp;#8211; diğer floroforlar farklı parçalar gerektirebilir</td></tr><tr><td>Dikroik ayna</td><td>Chroma Technology Corp.</td><td>485 DCLP</td><td>Proflavine ile kullanım için seçilmiştir &amp;#8211; diğer floroforlar farklı parçalar gerektirebilir</td></tr><tr><td>Objektif lens</td><td>Thorlabs Inc.</td><td>RMS 10X</td><td></td></tr><tr><td>Tüp lens</td><td>Thorlabs Inc.</td><td>AC-254-150-A1</td><td>CCD için gerekli büyütmeyi elde etmek üzere odak uzaklığını seçin</td></tr><tr><td>Kondenser lens</td><td>Thorlabs Inc.</td><td>ACL2520</td><td></td></tr><tr><td>Kafes küp ünitesi</td><td>Thorlabs Inc.</td><td>C6W, B1C, B3C, B5C, SM1CP2</td><td></td></tr><tr><td>Kafes çubukları ve plakaları</td><td>Thorlabs Inc.</td><td>ER05 (x4), ER1.5 (x2), ER2 (x2), ER6 (x2), CP02 (x3)</td><td></td></tr><tr><td>Katlama aynası ünitesi</td><td>Thorlabs Inc.</td><td>KCB1, PF10-03-G01</td><td></td></tr><tr><td>Lens tüpleri</td><td>Thorlabs Inc.</td><td>SM1L05, SM1L30, SM1V05 (veya SM1Z)</td><td></td></tr><tr><td>Adaptörler / kuplörler</td><td>Thorlabs Inc.</td><td>SM1A3, SM1A9, SM1T2 (x2)</td><td></td></tr><tr><td>SMA konnektörleri</td><td>Thorlabs Inc.</td><td>SM1SMA, 11040A</td><td></td></tr><tr><td>LED sürücüsü</td><td>Thorlabs Inc.</td><td>LEDD1B TPS001</td><td></td></tr><tr><td>Fiber optik demet</td><td>Sumitomo Bakelite Co., Ltd.</td><td>IGN-08/30</td><td>Daha büyük veya daha küçük demetler mevcuttur (Sumitomo / Fujikura)</td></tr></tbody></table>

yüksek çözünürlüklü fiber-optik mikroendoskopi in situ hücresel görüntüleme

High-resolution Fiber-optic Microendoscopy for in situ Cellular Imaging

Birçok biyolojik ve klinik çalışmalar, hücresel seviyede çözünürlük ile morfoloji ve fonksiyon uzunlamasına bir çalışma ve analiz gerektirir. Geleneksel olarak, birden fazla deneyler, ışık mikroskobu ile değerlendirilmesi için sıralı zaman noktalarında çalışma kaldırılır bireysel örnekleri ile paralel olarak işletiliyor. Konfokal, multiphoton ile birkaç intravital teknikleri geliştirdi ve ikinci harmonik mikroskopi yerinde 1 görüntüleme için kullanılacak yeteneklerini gösteren edilmiştir. Ancak, bu sistemler, gerekli altyapı, lazer tarama sistemleri ve kompleks ışık kaynakları içeren karmaşık ve pahalı. Burada 5.000 ABD $ altında-raf kapalı bileşenleri kullanarak bir gün içinde inşa edilebilir, yüksek çözünürlüklü bir mikroendoskop tasarım ve montaj için bir protokol mevcut. Platformu görüntü çözünürlüğü açısından esneklik sunar, alan görüntüsü, ve işletim dalga boyu, ve biz bu parametreler son kullanıcının özel ihtiyaçlarını karşılamak için kolaylıkla değiştirilebilir nasıl açıklar. Biz ve diğerleri eksize 6 ve yaşayan hayvan dokularının 2,5, ve in vivo 2,7 insan dokularında yüksek çözünürlüklü mikroendoskop (HRME), in vitro hücre kültürü 2-5 incelemiş bulunuyoruz. Kullanıcılar proflavine 2-4, benzoporphyrin türev monoacid halkası (BPD-MA) 5, ve fluoroscein 6,7, tam almış olan, ya da FDA investigational onayı da dahil olmak üzere birçok farklı floresan kontrast ajanların kullanımı, bildirdin İnsan denekler üzerinde kullanmak için. Yüksek çözünürlüklü mikroendoskopi, burada açıklanan formu, temel ve klinik bilimleri alanında çalışan araştırmacıların geniş bir itiraz edebilir. Bu teknik, kullanıcıya yüksek çözünürlüklü, in situ uzunlamasına görüntüleme gerçekleştirmek için sağlayarak, geleneksel masa üstü mikroskopi tamamlar, etkin ve ekonomik bir yaklaşım sunuyor.

Onlar kendi ana mikroçevresinin geliştikçe birçok biyolojik ve klinik durumlarda hücresel süreçleri incelemek için avantajlıdır. Burada montaj ve hücre kültürü, hayvan çalışmaları ve klinik hasta çalışmaları, gerçek zamanlı görüntüleme sağlayacak bir düşük maliyetli, fiber-optik mikroskop kullanımını tanımlamak.

Yüksek çözünürlüklü Fiber-optik Mikroendoskopi In situ Hücresel Görüntüleme

Birçok biyolojik ve klinik çalışma, hücresel düzeyde çözünürlükle morfoloji ve fonksiyonun boylamsal incelenmesini ve analizini gerektirmektedir.

Geleneksel olarak, hücresel düzeyde çözünürlükte mikroskobik analiz gerektiren biyolojik ve klinik çalışmalar, örneklerin ışık mikroskopuyla değerlendirilmek üzere ardışık zaman noktalarında çalışmadan çıkarıldığı ve birden fazla deneyin paralel olarak yürütüldüğü yöntemlerle gerçekleştirilmiştir; konfokal, çok fotonlu ve ikinci harmonik mikroskopi ise in situ görüntüleme için yararlı tekniklerdir. Gereken altyapı, tarama lazer sistemleri ve karmaşık ışık kaynaklarını içeren, karmaşık ve pahalı bir yapıdadır. Burada, 5.000 ABD doların altında bir maliyetle, hazır bileşenler kullanarak tek bir günde yüksek çözünürlüklü bir fiber optik mikro endoskop sisteminin nasıl kurulacağını gösteriyoruz.Platform; görüntü çözünürlüğü, görüş alanı ve çalışma dalga boyu açısından esneklik sunar. İlk olarak, bir ışık kaynağını, optik filtreleri, lensleri, bir fiber optik demetini ve bir CCD kamerayı barındırmak üzere basit bir epi floresan mikroskop iskeleti kurulur. Ardından, fiber optik demetinin CCD kamera üzerinde büyütülmüş bir görüntüsünü oluşturan görüntüleme lensleri monte edilir.Numuneye floresan eksitasyon ışığı sağlamak amacıyla, ardından aydınlatma optikleriyle birlikte bir LED kaynağı kurulur. Son olarak, monte edilmiş mikro endoskop ile gerçekleştirilen gerçek zamanlı görüntüleme; in vitro kültürler, in vivo hayvan modelleri ve insan denekler dahil olmak üzere floresanla işaretlenmiş numunelerin hücresel düzeydeki ayrıntılarını ortaya çıkarır. Bu tekniğin konfokal veya çok fotonlu mikroskopi gibi mevcut yöntemlere kıyasla temel avantajı, yeterince basit ve düşük maliyetli olması sayesinde farklı alanlarda çalışan araştırmacıların tekniği hızla uygulayabilmeleri ve kendi özel ihtiyaçlarına göre özelleştirebilmeleridir.Burada açıklanan yüksek çözünürlüklü mikro endoskop, montaj ve uygulamada çeşitli varyasyonlara izin veren bir temel konfigürasyon olarak değerlendirilmelidir. Belirli bir uygulama için bileşen seçerken; florofor konsantrasyonu, fotobezme aydınlatması, şiddeti, kamera hassasiyeti, kazanç ve pozlama süresi arasında floresan mikroskobisine özgü olan ilişkileri göz önünde bulundurun. Bu platform, floresan kontrast maddesi olarak proflavin ile kullanılmak üzere tasarlanmıştır, ancak diğer floresan boyalarla çalışacak şekilde konfigüre edilebilir.Pro flavin, sırasıyla 445 nanometre ve 515 nanometre pik absorbsiyon ve emisyon dalga boylarına sahip parlak bir çekirdek boyasıdır. Diğer kontrast ajanlarının kullanımı, mikro endoskop sistemini kurmak için kullanıcının uyarım emisyon ve dikroik filtreleri uygun şekilde seçmesini gerektirecektir. İki adet 6 inçlik kafes çubuğunu iki adet 1,5 inçlik kafes çubuğuna bağlayarak 7,5 inç uzunluğunda bir çift çubuk oluşturarak başlayın. Çubukları katlanır ayna ünitesinin bir yüzüne vidalayın, ardından bir inç çapında bir ayna takın.Ardından, katlanır ayna ünitesinin karşı yüzüne dört adet 0,5 inçlik çubuk vidalayın. Kafes küpünü, iki alt geçiş deliği aracılığıyla 7,5 inçlik kafes çubuklarının üzerine kaydırın. İki inçlik çubukları kafes küpünün yan yüzüne vidalayın.C mount'tan SM1'e dönüştürücü bir adaptör kullanarak kamerayı bir kafes plakasına takın. Kafes plakasını, katlanır ayna ünitesinin yüzeyiyle aynı hizada olacak şekilde 0,5 inçlik kafes çubuklarına sabitleyin. Fiber optik demetin görüntüsünü kamera üzerinde oluşturmak için bir inç çapında bir tüp lens seçin.Lensin odak uzaklığı, fiber optik demetin nedeninin en az iki piksel tarafından örneklenmesini sağlayacak şekilde seçilmelidir. Kameraya görüntüleme yapıldığında, lensi üç inç uzunluğundaki bir lens tüpüne yerleştirin ve lensi bir sabitleme halkasıyla sabitleyin. Sabitleme halkalarının uzun lens tüplerine vidalanması için bir kurbağacık anahtar kullanılması faydalıdır.Emisyon filtresini üç inçlik lens tüpünün içine, ilk sabitleme halkasının üzerine yerleştirin ve filtreyi sabitlemek için başka bir halka daha ekleyin. Filtre yönleminin, filtre üreticisi tarafından belirtilen standartlara uygun olduğundan emin olun. Lens tüpünü, kafes kübün CCD kameraya en yakın olan yan kısmına vidalayın.Bu konum burada da gösterilmiştir. Diyagramda, bu lens ve filtrenin üç inçlik lens tüpü olmadan gösterildiğine dikkat ediniz. Netlik sağlamak için kamerayı bir bilgisayara bağlayın ve görüntüyü ekrandan izleyin.Kafes düzeneğini uzak bir nesneye yöneltin ve nesnenin görüntüsü netleşene kadar kafes küpünü raylar boyunca kaydırın. Kafes küpünün yanlarında bulunan dört vidayı sıkmak için bir tornavida kullanın. Bu vidalar sıkıldığında rayları kavrayarak küpü konumunda sabitler.Bu, tüp lenslerin, sonsuzluk düzeltmeli objektif lens ile birleştirildiğinde kamera üzerinde fiber demetin odaklanmış bir görüntüsünü oluşturmasını sağlayacaktır. Ardından, diyik aynasını tutucuya yerleştirin ve kafes küp içinde 45 derecelik açıya konumlandırın. Objektif lensi, bir RMS - SM1 diş adaptörü ve ayarlanabilir bir lens tüpü aracılığıyla, kafes küpün tüp lens tutucusunun karşı tarafındaki yüzüne vidalayın.Ardından, bir kafes plakasına SMA konnektörü vidalayın ve bunu objektif lensin çalışma mesafesine yaklaşık olarak denk gelecek şekilde çubuklara monte edin. Kafes kübünün açık kenarlarına taban plakasını ve uç kapağını ekleyin. Daha sonra, bir LED'i kafes plakasına monte edin ve onu iki inçlik çubukların ucuna kaydırarak yerleştirin.Lens tüpünün yan tarafı kafes kübe vidalandığında, objektif lensin arka açıklığını dolduran bir LED görüntüsü oluşturacak şekilde 0,5 inçlik bir lens tüpüne bir lens ekleyin. Ayrıca, eksitasyon filtresini lens tüpüne yerleştirin. Bu aşamada, epoksi kullanarak aydınlatma ışık yoğunluğunu kontrol etmek için bir LED sürücüsü kullanılabilir.1030 mikronluk bir fiber için olan SMA konnektörü, 720 mikron görüş alanı fiber optik demetine takın. Fiber optik konnektörleme hakkında ayrıntılar için T Thor labs, parça numarası FN doksan altı, "Optik fiberlerin konnektörlenmesi ve cilalanmasına yönelik bir kılavuz" kaynağına başvurun.SMA konnektör göz demetini, kafes çubuklarına monte edilmiş SMA yuvasına vidalayın. Demetin distal ucunu geniş bantlı bir ışık kaynağına doğru yönlendirin; floresan aydınlatma yeterli olacaktır. Ardından, demetin proksimal yüzünün görüntüsünü CCD kameradan gözlemleyin. Son olarak, objektif lensin konumunu kafes küpüne vidalayarak veya gevşeterek ayarlayın.Fiber demeti görüntüsü netleşene kadar, bireysel neden açıkça görünür olmalıdır. Mikro endoskopun uzaysal çözünürlüğü, fiber demetinin distal ucuna bir mikro lens veya lens düzeneği ekleyerek artırılabilir. Bu optikler, demet ucunun doğrudan doku üzerine yerleştirilmesi yerine, ucun düşük büyütme ile doku yüzeyine görüntülenmesi şeklinde yapılandırılmıştır.Böylece fiber demetin ışık iletiminden kaynaklanan uzamsal örnekleme frekansını artırın. DEM büyütme derecesi, uzamsal çözünürlükteki artışa ve aynı zamanda görüş alanındaki orantılı bir azalmaya karşılık gelir. Uygulamanız için istenen büyütme ve çalışma mesafesine sahip bir GRIN lens seçin.Lens çapının, birlikte çalışmayı planladığınız fiber demetinin çapıyla eşleştiğinden emin olun. Hassas hizalama için fiber demetini ve GRIN lensi, düşük büyütmeli bir mikroskop veya stereoskop altında, ayrı üç eksenli manuel konumlandırma tablalarına monte edin.Ardından, lensin veya demet yüzeyinin üzerine bir damla optik yapıştırıcı yerleştirin. Manuel konumlandırıcıları kullanarak, iki bileşeni birbiriyle temas ettirin. Yapıştırıcıyı kürlemek için arayüzü, üretici tarafından önerilen dozda UV ışığına maruz bırakın.Gradyan indeksli (grin) lensi ve yapışma ara yüzeyini korumak için, eklemi çevrelemek üzere kısa bir alüminyum kapiler tüp kullanın. Tüpü eklemin üzerine kaydırın ve tüpün her iki ucuna bir damla epoksi sürerek sabitleyin; montajı tamamlamak için ısı ile daralan makaron kullanın. Mikro endoskopik görüntülemeden önce, hücreleri ve kültürleri görüntülemek için görüntülenecek hücrelere veya dokuya kontrast madde uygulayın.Öncelikle, büyüme ortamı pipetle uzaklaştırılır. Ardından, pro flavin çözeltisi kuyucuğa nazikçe pipetle eklenir. Bir dakikaya kadar süren kısa bir inkübasyonun ardından, pro flavin çözeltisi pipetle uzaklaştırılır ve atılır.Kuyucuğa taze PBS çözeltisi ekleyip uzaklaştırarak hücreleri durulayın; stabilite için fiber demetinin distal ucunu, x, Y, Z eksenlerinde manuel konumlandırma aşamalarına sahip güvenli bir fikstüre yerleştirin. Boyanın hücrelere veya dokuya uygulanmasını takiben görüntüleme sırasında, fiber optik demeti numune ile hafif temasa gelecek şekilde yerleştirin. Fiber optik demetin görüntüsünü, kamera üreticisi tarafından sağlanan yazılımı veya geliştirmek isteyebileceğiniz herhangi bir özel yazılımı kullanarak bilgisayar ekranından görüntüleyin.Kabul edilebilir parlaklıkta bir görüntü elde etmek için kameranın pozlama süresi ve kazanç ayarlarını düzenleyin. Doğru şekilde monte edildiğinde, mikro endoskop, koherent bir fiber optik demet aracılığıyla aktarılan bir epi-floresan mikroskop gibi çalışacaktır. En iyi görüntüleme sonuçları için üç temel koşulun karşılandığından emin olunmalıdır.Öncelikle, sistemin tam çözünürlüğüne ulaşmak için fiber demetinin proksimal yüzü, odak kayması olmadan CCD kameraya yansıtılmalıdır. Burada, bir fiber demetinin bir bölümü kötü odaklama, hafif odaklama ve iyi odaklama ile görüntülenmiştir. Optimum odaklama, objektif lensin demet yüzüne göre gerçek konumunun ayarlanmasıyla bulunur.İkinci olarak, fiber demetinin proksimal yüzü tüm çapı boyunca homojen bir şekilde aydınlatılmalıdır. Daha önce açıklandığı üzere, bu durum aydınlatma optiklerinin kolimasyonlu aydınlatma için yapılandırılmasıyla sağlanır. Burada gösterilen görüntü, homojen bir floresan numunenin bu tercih edilen yapılandırmada aydınlatılmasıyla elde edilmiştir.Kritik aydınlatma altındaki karşılık gelen sonuç burada gösterilmiştir. LED'in yapısı fiber demet yüzeyine görüntülenmekte ve bu durum, gerçek numune yapısının üzerine binen istenmeyen bu desenin oluşmasına yol açmaktadır. Üçüncü olarak, fiber demetin hem proksimal hem de distal yüzeylerinin temiz olduğundan, çizik ve kırıklardan arındırıldığından emin olmak önemlidir.Bu örnekte, demet yüzeyine görüntü kalıntıları yapışmış durumdadır ve fiber çevresinde saat beş yönünde küçük bir kırık şeklinde hasar görülmektedir. Kalıntılar, lens kağıdı ve izopropanol veya standart fiber optik temizleme araçları kullanılarak, geleneksel fiber optik konnektörlerle aynı şekilde temizlenerek demet yüzeylerinden uzaklaştırılabilir. 1483 hücre pro flavin ile işaretlenmiş ve çıplak fiber demeti numunenin üzerine hafifçe yerleştirilmiştir.Bir 2,5 x grin lensin demet ucuna bağlanmasıyla elde edilen in vitro görüntüleme burada gösterilmektedir; bu işlemle uzaysal çözünürlükte bir iyileşme ve görüş alanında bir daralma sağlanmıştır. Bu videoda görüldüğü üzere, 0,5 milimetre dış çapa sahip bir fiber demetin 21 gauge iğneden geçirilip bir fare meme yağ pedi dokusuna ilerletildiği in vivo görüntüleme gerçekleştirilmiştir; adipositler, kardiyak döngü kaynaklı hareketle birlikte net bir şekilde görülmektedir. Bu örnekte, 1,5 milimetre dış çapa sahip daha büyük bir fiber demet kullanılarak sağlıklı bir insan gönüllüsünün oral mukozasının görüntülemesi yapılmıştır.Tüm örneklerde, gösterilen pro flavin nükleer işaretleme floresan kontrast maddesi olarak kullanılmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, hücrelerin ve dokuların in C iki floresan görüntülemesi için bir fiber optik mikro endoskopun nasıl tasarlanacağı ve monte edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

high-resolution-fiber-optic-microendoscopy-for-situ-cellular

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Özel, gerçek zamanlı bir konfokal tarama görüntüleme sistemi komple inşaat açıklanmıştır. Video hızı mikroskopi ve mikroendoskopi için kolayca kullanılabilen bu sistem, maliyetinin bir kısmını, standart ticari konfokal sistemlerini kullanarak erişilebilir değil görüntüleme geometrileri ve uygulamaları bir dizi sağlar.

Video-rate Tarama Konfokal Mikroskop ve Mikroendoskopi

Yetişkin farelerin lenf düğümlerinde 120 um derinliğe kadar kontrastlı sahip yüksek-çözünürlüklü intravital görüntüleme uzamsal bir multi-odak iki foton mikroskop uyarım modelini modüle edilmesi ile elde edilir. 100 mikron derinliğinde biz böylece saçılma ve difraksiyon sınırlarını engellemeyi, 487 nm çözünürlük (lateral) ve 551 nm (eksenel) ölçüldü.

Germinal Merkezleri derece Çözülmüş Intravital Çizgili-aydınlatma Mikroskopi

Dört boyutlu (4D) görüntüleme omurgalı sinir terminalleri canlı endozomlar iki tip arasındaki davranış ve etkileşimleri incelemek için kullanılmaktadır. Bu küçük yapıların hareketi gibi endozom füzyon ve ekzositoz gibi olayların onay izin, üç boyutlu olarak karakterize edilir.

Dört boyutlu Floresans Görüntüleme ile Sinir Terminalleri Yaşayan endozom Dinamiği Görselleştirme

Küçük hayvan görüntüleme teknikleri seri tetkikler ve in vivo terapötik müdahaleyi sağlar. Son zamanlarda, uygulamaların kapsamı önemli genişletmiştir ve şu anda kolon tümör gelişiminin değerlendirilmesi, yara iyileşmesi ve enflamasyon izleme içerir. Bu protokol kemirgen endoskopi bu çeşitli potansiyel uygulamaları göstermektedir.

Murin için Endoskop In Vivo Karsinojenez ve bağırsak Değerlendirilmesi Multimodaller Görüntüleme Yara İyileşmesi ve İltihap

Yüzeysel doku görüntü verilerini hemoglobin konsantrasyonu, melanin konsantrasyonu ve oksijen satürasyonu dahil olmak üzere doku fizyolojik parametreleriyle birlikte kaydedebilen multimodal bir mikroendoskopun montajı ve kullanımı açıklanmıştır. Bu teknik, doku yapısını ve perfüzyonu değerlendirmek için yararlı olabilir ve araştırmacının bireysel ihtiyaçları için optimize edilebilir.

Multimodal Görüntüleme ve Non-invaziv için Spektroskopisi Fiber paket Mikroendoskopi Platformu,<em&gt; İn Vivo</em&gt; Doku Analizi

Genetik modifikasyondan sonra tüm hücrelerde mitokondri ve endoplazmik retiplinin dağılımını incelemek için bir protokol sunuyoruz, askorbat peroksidaz 2 ve horserpu peroksidaz boyama da dahil olmak üzere bağıntılı ışık ve hacim Elektron Mikroskopisi kullanılarak aynı bölümde hedef geni olan ve olmayan hücrelerin seri bölümlemesi ve elektron mikroskobu ile seri görüntüleme.

Göreli ışık ve hacim elektron mikroskobu ile mitokondri ve endoplazmik reticulum görüntüleme

Subkonjonktival enjeksiyondan sonra gözdeki lipozomların mekansal-zamansal dağılımını invaziv olmayan bir şekilde incelemek için fiberoptik konfokal lazer miksanoskopi (CLM) kullanımı için bir protokol sunuyoruz.

Fiberoptik Konfokal Lazer Mikroendoskopi Kullanılarak Oküler İlaç Dağıtım Sistemlerinin Spatio-Temporal In Vivo Görüntülemesi

Süper çözünürlüklü mikroskopi, mayozdaki sinaptonemal kompleks içindeki bileşenlerin organizasyonu hakkında ayrıntılı bir fikir verebilir. Burada, Caenorhabditis elegans synaptonemal kompleksinin bireysel proteinlerini çözmek için bir protokol gösteriyoruz.

Caenorhabditis elegans Germline İçindeki Sinaptonemal Kompleksin Süper Rezolüsyonlu Mikroskopisi

mScarlet adı verilen bir floresan proteini kullanarak Epon gömme sonrası bağıntılı ışık ve elektron mikroskobu için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz. Bu yöntem, floresan ve üst yapıyı aynı anda koruyabilir. Bu teknik, çok çeşitli biyolojik uygulamalara uygundur.

Epon Post Gömme Korbağıntılı Işık ve Elektron Mikroskobu

Bu protokol, 3D lazer baskı kullanılarak implante edilebilir bir entegre görüntüleme penceresinin imalatını açıklar. Pencere, mikro iskelelerle birleştirilmiş bir mikro mercek sisteminden oluşur. Yöntem, biyouyumlu fotorezist SZ2080'in sürekli bir sırayla iki fotonlu polimerizasyonunu (2PP) içerir ve üretim verimliliğini ve farklı bileşenler arasındaki hizalamayı optimize eder.

Gelişmiş In Vivo Görüntüleme için Mikroyapılı Görüntüleme Penceresine Entegre Edilmiş İmplante Edilebilir Optiklerin Mikrofabrikasyonu

Beyin örneklerindeki tüm hücrelerin mezoscale olarak tarafsız görüntülenmesini sağlayan ve aynı örnekte bant tabanlı seri taramalı elektron mikroskopisinin görüntüleme iş akışına sorunsuz entegre edilebilen Optik Çok Katmanlı Girişim Tomografisi (OMLIT) adlı yeni bir görüntüleme tekniği tanıttık.

Mezoskopik Tüm Hücreli Beyin Haritalama İçin Taramalı Elektron Mikroskopi Uyumlu Optik Görüntüleme Yöntemi

Keşfedin düşük maliyetli fiber-optik mikroendoskop kurulumunu, canlı hücre görüntüleme için 5.000 doların altında maliyetle bir günde tamamlanabilir. Bu yöntem, in vitro, in vivo ve insan deneklerinde gerçek zamanlı hücresel detayları gözlemlemeyi sağlar.

Yüksek çözünürlüklü Fiber-optik Mikroendoskopi In situ Hücresel Görüntüleme

Daha fazla video keşfet