JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 1:30 dk • March 4th, 2025
Hücre ölümü ve DNA parçalanması ile karakterize edilen, apoptoz geçiren nöronları içeren önceden sabitlenmiş, deparafinize edilmiş ve yeniden sulandırılmış bir koronal beyin dilimi ile başlayın.
TUNEL testini kullanarak apoptotik hücre ölümünü tespit etmek için, beyin dilimini proteinaz-K enzimi ile tedavi edin.
Proteinaz-K nöronlara girer ve DNazları inaktive ederek DNA bozulmasını önler.
Kalan enzimleri çıkarmak için dilimi durulayın.
Floresan boya etiketli deoksiüridin trifosfatlar veya dUTP'ler ve terminal deoksinükleotidil transferaz veya TdT enzimi içeren bir tampon ekleyin, ardından inkübe edin.
Bol miktarda DNA fragmanına sahip apoptotik nöronlarda, TdT enzimi bu floresan dUTP'leri DNA fragmanlarının serbest 3'-hidroksil gruplarına bağlar.
Buna karşılık, sağlıklı nöronların DNA'sı etiketlenmemiş olarak kalır.
Dokuyu hem sağlıklı hem de apoptotik nöronlarda DNA'ya bağlanan ve çekirdeklerini maviye boyayan nükleer bir boya olan DAPI ile boyayın.
Görselleştirme üzerine, hem mavi hem de yeşil floresan içeren nöronlar, beyin dokusunda apoptotik hücre ölümünü doğrular.