JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 1:28 dk • March 4th, 2025
İntraserebral kuduz virüsü ile enfekte olmuş farelerden tanımlanmış ölüm sonrası aralıklarla sabit beyin bölümleri toplayın.
Virüs, serebral korteksteki piramidal nöronları enfekte eder ve eksprese edilen viral proteinler, inklüzyon cisimcikleri olarak bilinen intrasitoplazmik granüler yapılar içinde lokalize olur.
Fiksasyonun neden olduğu reaktif grupları nötralize etmek ve arka plan lekelenmesini en aza indirmek için bölümlere amonyum klorür uygulayın.
Endojen peroksidazı etkisiz hale getirmek ve spesifik olmayan sinyalleri azaltmak için bölümleri hidrojen peroksite daldırın.
Hücresel zarları geçirgen hale getirmek ve spesifik olmayan bağlanma bölgelerini maskelemek için bir deterjan içeren bir bloke edici solüsyon uygulayın.
Viral proteinlere özgü primer antikorlarla inkübe edin.
Primer antikorlara bağlanan biotin konjuge ikincil antikorlarla yıkayın ve inkübe edin.
Tekrar yıkayın ve biotine bağlanan peroksidaz enzimi konjuge avidin'i ve ardından enzimin renkli bir ürüne dönüştürdüğü kromojenik bir substratı ekleyin.
Mikroskop kullanarak viral proteinler içeren immünoreaktif inklüzyon cisimlerini görselleştirin.
Postmortem sürenin artmasıyla, nöronal bozulma ve inklüzyon cisimlerinin kaybolması belirginleşir.