JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 1:25 dk. • March 4th, 2025
Bir kontrol faresinden ve optik sinir hasarı olan bir sıçandan sabit optik sinir kesitleri alın.
Kontrol bölümü, konsantrik plazma zarı katmanları içeren sıkıca paketlenmiş miyelin kılıflara sahip aksonlar sergiler. Yaralı bölüm, büyük boşluklarla dekompresyona uğramış miyelin sergiler.
Lipitlere bağlanan ve miyelin kılıfının kontrastını artıran bir osmiyum-ferrosiyanür kompleksi ile inkübe edin.
Osmiyum için ek bağlanma bölgeleri oluşturmak için tiyokarbohidrazid ile tedavi edin.
Lipid kontrastını daha da artırmak için osmiyumu yeniden uygulayın.
Makromoleküllere bağlanan ve yapısal kontrastı artıran ağır metallerle lekeleyin.
Artan alkol konsantrasyonları kullanarak kurutun ve reçine gömmek için aseton ile durulayın.
Dokuyu reçineye gömün ve görüntü kalitesini artırmak için reçineyi altınla kaplayın.
Aynı anda dilimlemek ve görüntülemek için seri blok yüz taramalı elektron mikroskobu kullanın. Elektron demetini yüzeye odaklayın ve görüntü oluşturmak için geri saçılan elektronları tespit edin.
Miyelin kılıfları koyu görünürken, hasarlı kılıfların içindeki boşluklar daha açık görünür ve normal ve hasarlı miyelin arasında ayrım yapılmasına izin verir.