JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 1:30 dk. • March 4th, 2025
Sağ beyin yarımküresine kısıtlı kan akışına maruz kalan ve BBB hasarına neden olan bir sıçan alın.
Hasarlı BBB'yi geçen ve beyne ulaşan florofor etiketli albümini intravenöz olarak enjekte edin.
Kimyasal olarak sabitlenmiş beyin bölümleri elde edin.
Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bloke edici tampon ekleyin.
Florofor etiketli albümini hedef alan peroksidaz konjuge antikorları uygulayın.
Peroksidazın elektron yoğun bir çökeltiye dönüştürdüğü kromojenik bir substrat ekleyin.
Membran lipidlerini sabitlemek ve kontrastı artırmak için osmiyum tetroksit ekleyin.
Artan alkol konsantrasyonları ile bölümleri kurutun.
Kontrastı artırmak için nükleik asitlere ve proteinlere bağlanan uranil asetat ekleyin.
Artan alkol konsantrasyonları ile tekrar dehidre edin, reçine gömme için propilen oksit ile bitirin. Bölümleri reçineye gömün.
Kromojen lekeli bölgeleri mikroskobik olarak tanımlayın ve eksize edin.
Bu bölümleri reçineye yeniden gömün ve ultra ince dilimler hazırlayın.
Dilimleri elektron mikroskobu (EM) ızgaralarına monte edin.
Hücre dışı matris kontrastını artırmak için kurşun sitrat ile boyayın.
BBB bütünlüğünü incelemek için EM ile devam edin.