JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 1:30 dk • March 4th, 2025
Parafine gömülü formalinle sabitlenmiş bir insan beyin dokusunu ele alalım. Doku, hem hücrelerin içinde hem de hücre dışında bulunan patojenik mikropları sergiler.
Parafini çıkarmak için yıkayın, ardından azalan alkol konsantrasyonlarını kullanarak dokuyu yeniden sulandırın.
Formalin kaynaklı protein çapraz bağlarını kırmak için asidik bir tamponla ısıtın ve bakteriler üzerindeki antijenik epitopları maskeleyin.
Fiksasyon sırasında oluşan kalıntı reaktif aldehit gruplarını nötralize etmek için amonyum klorür ile inkübe edin ve antikorlarla spesifik olmayan etkileşimi önleyin.
Hücresel zarlara nüfuz etmek ve antikor penetrasyonunu kolaylaştırmak için bir deterjanla muamele edin.
Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir bloke edici solüsyon uygulayın.
Hücre dışı ve hücre içi mikropları hedef alan birincil antikorlarla inkübe edin.
Birincil antikorlara bağlanan florofor konjuge ikincil antikorları uygulayın.
Çekirdeği boyamak için floresan DNA bağlayıcı bir boya ekleyin.
Otofloresan hücre içi granüllerden floresanı söndürmek ve arka plan sinyallerini en aza indirmek için bir otofloresan giderici ile muamele edin.
Floresan mikroskobu kullanarak, mikropların varlığını doğrulamak için dokuyu inceleyin.