JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 1:25 dk. • March 4th, 2025
Proteaz inhibitörleri ve bir deterjan içeren bir ekstraksiyon tamponunda bir fare beyin dokusu ile başlayın.
Proteinleri tampona bırakmak için dokuyu homojenize edin. Proteaz inhibitörleri, proteaz aktivitesini bloke ederek protein bozulmasını önler.
Süpernatanı proteinlerle santrifüjleyin ve toplayın.
Proteini denatüre etmek için deterjan ve indirgeyici bir madde içeren bir yükleme tamponu ekleyin.
Proteinleri kontrolden yükleyin ve bir SDS-PAGE jeli üzerine numune alın. Proteinleri farklı bantlara ayırmak için bir elektrik alanı uygulayın.
Elektroforezden sonra, protein bantlarını bir zar üzerine aktarın.
Spesifik olmayan etkileşim bölgelerini bloke etmek için membrana yağsız süt içeren bir tampon uygulayın.
Spesifik olarak fosforile tau proteinlerine bağlanan birincil antikorlarla inkübe edin.
Enzim konjuge ikincil antikorlarla yıkayın ve inkübe edin.
Fosforile tau proteinlerini doğrulayan bir ışık sinyali üretmek için enzimle reaksiyona giren bir substrat ekleyin.
Kontrole kıyasla numunede yoğun bir ışık bandı nörodejeneratif patolojiyi düşündürmektedir.