JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 1:22 dk • March 4th, 2025
Hem normal prion proteinlerini hem de nörodejeneratif hastalıklardan sorumlu yanlış katlanmış prion agregatlarını içeren bir memeli beyninden doku homojenatını alın.
Normal prionları sindirmek için proteolitik bir enzim ile inkübe edin ve dirençli agregaları sağlam bırakın.
Proteinleri doğrusallaştırmak ve düzgün bir negatif yük vermek için agregaları yüksek sıcaklıkta denatüre edici bir tampon ile muamele edin.
Numuneyi bir elektroforez jeli üzerine yükleyin ve proteinleri bantlara ayırın, bu da agregaların varlığını doğrular.
Bir elektrik alanı kullanarak, ayrılan proteinleri bir zar üzerine aktarın.
Spesifik olmayan bağlanma bölgelerini maskelemek için zarı bir bloke edici çözelti içinde inkübe edin.
Spesifik olarak prion agregatlarına bağlanan peroksidaz enzim etiketli antikorlarla inkübe edin.
Bağlanmamış antikorları çıkarmak için zarı yıkayın ve spesifik olmayan sinyalleri en aza indirin.
Bir kemilüminesan substrat ve bir oksitleyici ajan ekleyin, peroksidazın substratı oksitlemesini ve ışık üretmesini sağlayın.
Homojenattaki yanlış katlanmış prionları ölçmek için ışık yoğunluğunu ölçün.