JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 1:23 dk. • March 4th, 2025
Lewy cisimcikleri veya LB'ler içeren hastalıklı insan beyin dokusunun yeniden sulandırılmış bir bölümünü alın.
Endojen peroksidazları inhibe etmek ve spesifik olmayan lekelenmeyi önlemek için hidrojen peroksit çözeltisi ile inkübe edin.
LB'lerdeki alfa-sinüklein epitoplarını maskelemek için bölümü sitrat tamponunda ısıtın.
Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir bloke edici ajan uygulayın.
Fazla bloke edici ajanı çıkarın ve bölümü alfa-sinükleini hedefleyen birincil antikorlarla inkübe edin.
Bağlanmamış antikorları yıkayın.
Primer antikorlara bağlanan biyotinile edilmiş sekonder antikorları uygulayın.
Fazla antikorları çıkarın.
Biyotinile edilmiş ikincil antikorlara bağlanan streptavidin-biotin-peroksidaz kompleksleri ekleyin.
Bağlanmamış kompleksleri yıkayın.
Peroksidaz ile reaksiyona girerek kahverengi çökeltiler oluşturan renk üreten bir substrat uygulayın.
Fazla alt tabakayı çıkarın.
Mikroskop altında nöronal sitoplazmadaki LB'ler içindeki kahverengi lekeli alfa-sinükleine karşı kontrastı artırarak, çekirdekleri maviye boyamak için bir karşı boya ile muamele edin.