JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 1:29 dk • March 4th, 2025
Dopaminerjik nöronlar açısından zengin bir beyin dilimi ile başlayın.
Dilimi floresan yanlış nörotransmiterler veya FFN'ler içeren aCSF'de inkübe edin.
FFN'ler, dopamini taklit eden ve nötr ortamlarda asidik ortamlardan daha yoğun floresan pH'a duyarlı belirteçlerdir.
Bu FFN'ler seçici olarak dopaminerjik nöronlara girer ve pH değişiminin FFN floresansını azalttığı asidik sinaptik veziküllere yüklenir.
Bu dilimi bir görüntüleme odasına aktarın, sabitleyin ve bağlanmamış FFN'leri çıkarmak için aCSF ile sürekli perfüze edin.
FFN birikimini doğrulamak için dilimi floresan puncta olarak görüntüleyin.
Ardından, elektrik stimülasyonu sağlamak için bir uyarıcı elektrot yerleştirin.
Elektrik darbeleri, kalsiyumun nörona girmesine neden olarak, nöronal membran ile sinaptik vezikül füzyonuna ve FFN'lerin hücre dışı sinaptik yarığa salınmasına neden olur.
Sinaptik yarığın nötr pH ortamında, FFN floresansı yoğunlaşır.
Hücre dışı boşlukta dağınık floresansı gözlemlemek için dilimi tekrar görüntüleyin ve sinaptik veziküllerden FFN salınımını doğrulayın.