JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 1:28 dk • March 4th, 2025
Çeşitli yaşlardaki bireylerden toplanan beyin omurilik sıvısı veya BOS ile başlayın.
Hücresel kalıntıları peletlemek için numuneyi santrifüjleyin ve süpernatanı toplayın.
Süpernatant, nöron oluşumu veya nörojenezde yer alan proteinleri içerir.
Streptavidin ile kaplanmış çok kuyulu bir plaka alın. Spesifik olmayan bağlamayı önlemek için bir engelleme aracısı ekleyin.
Spesifik nörojenez ile ilgili proteinlere seçici olarak biyotin etiketli yakalama antikorları ekleyin.
Antikorları streptavidin'e bağlamak için çalkalama ile inkübe edin, ardından plakayı yıkayın.
BOS örneğini rutenyum etiketli tespit antikorları ile birlikte kuyucuklara ekleyin, ardından çalkalama ile inkübe edin.
Spesifik nörojenez ile ilgili proteinler, antikorları yakalamak için bağlanır ve aynı anda tespit antikorları ile etkileşime girer.
Plakayı iyice yıkayın ve bir algılama tamponu ekleyin.
Plakayı bir görüntüleme sistemine yerleştirin.
Algılama tamponu, rutenyumdan ışık emisyonunu tetikler.
Numuneler arasında ışık yoğunluğundaki bir azalma, nörojenezle ilişkili protein seviyelerinde yaşa bağlı azalmaları gösterir ve nörojenezde bir düşüşü doğrular.