JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 1:29 dk • March 4th, 2025
Astrositlerin bir ko-kültürü ve farklılaşma ortamında nöronal kök hücre agregatlarının farklılaşması ile başlayın.
Astrositler, kök hücrelerin nöronlara ve astrositlere olgunlaşmasını ve farklılaşmasını artıran sinyal molekülleri salgılar.
Ardından, hücre yapısını korumak için bir fiksatif ekleyin ve ardından yıkayın.
Hücre zarlarına nüfuz etmek için bir deterjan solüsyonu ekleyin, ardından yıkayın.
Spesifik olmayan bağlanma bölgelerini engellemek için bir engelleme reaktifi tanıtın.
Olgun nöronların ve astrositlerin protein belirteçlerine spesifik olarak bağlanan birincil antikorları ekleyin. Bağlanmamış antikorları çıkarmak için yıkayın.
Ardından, yeşil ve kırmızı floresan etiketli ikincil antikorları ekleyin ve inkübe edin. Bu antikorlar, ilgili primer antikorlara bağlanarak hücrelere farklı floresan sağlar.
Çekirdekleri maviye boyamak için bir nükleer boya ekleyin.
Son olarak, konfokal bir mikroskop kullanarak hücreleri gözlemleyin.
Agregalar içinde, yeşil floresan hücreler olgun nöronları gösterirken, kırmızı floresan hücreler astrositleri temsil eder. Bu, nöronal olgunlaşmayı kolaylaştırmada hücre-hücre etkileşimlerini doğrular.