Transmisyon elektron mikroskobu kullanılarak siyanobakteriyel hücre dışı veziküllerin görselleştirilmesi

Temiz bir plastik film üzerine polivinil resmi reçine kaplı transmisyon elektron mikroskobu veya TEM ızgarası yerleştirin.

Izgaraya konsantre ve saflaştırılmış hücre dışı veziküller veya EV'ler, nano boyutlu, zara bağlı parçacıklardan oluşan bir süspansiyon ekleyin.

Bu EV'ler siyanobakteriler tarafından salgılanır ve zarları içinde makromoleküller taşırlar.

EV'lerin reçine kaplı yüzeyine adsorbe olmasına izin vermek için ızgarayı inkübe edin.

Fazla süspansiyonu emmek için ızgara kenarına temiz bir filtre kağıdıyla dokunun.

Yapışan vezikülleri lekelemek için ızgarayı uranil asetat üzerinde yüzdürün.

Uranil asetat, vezikülleri çevreleyerek görüntüleme sırasında kontrastı artıran koyu bir taslak oluşturur.

Izgarayı çıkarın ve fazla lekeyi emmek için filtre kağıdı kullanın.

Kalan lekeyi çıkarmak için ızgarayı ultra saf suyla yıkayın. Yıkamayı tekrarlayın ve ardından kurumaya bırakın.

Son olarak, morfolojilerini, boyutlarını ve saflıklarını değerlendirmek için TEM kullanarak EV'leri görselleştirin.

Dikkatlice beş mikrolitre vezikül uygulayın ve beş dakika bekletin. Bir ızgaranın kenarını bir parça temiz filtre kağıdına dokundurarak numuneyi çıkarın.

Plastik filmle kaplı düz bir yüzeye 20 ila 50 mi