JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:12 dk. • August 29th, 2025
Kalın bir peptidoglikan hücre duvarına sahip bir bakteri olan Staphylococcus aureus'un bir kültürünü alın.
Kültürü antibiyotik içeren taze ortamda seyreltin ve bakteri üremesini teşvik etmek için çalkalayarak ılık bir sıcaklıkta inkübe edin.
Kültürü bir tüpe aktarın ve bakterileri peletlemek için santrifüjleyin.
Süpernatanı atın ve bakterileri hasardan korumak için peleti buzun üzerine yerleştirin.
Peleti lizis tamponunda yeniden süspanse edin ve silika boncukları içeren bir tüpe aktarın.
Tüpü mekanik bir hücre lizis cihazına yerleştirin ve çalkalamayı başlatın.
Bakteriler ve boncuklar arasındaki hızlı çarpışmalar, kesme kuvvetleri oluşturur. Bu, bakterileri parçalayarak DNA, RNA ve RNA-protein komplekslerini serbest bırakır.
Lizis tamponundaki iyonlar RNA yapılarını stabilize ederken, tampondaki indirgeyici ajanlar RNA'yı parçalayan enzimleri etkisiz hale getirir.
Şimdi, kalıntıları peletlemek için karışımı tekrar santrifüjleyin.
Daha fazla analiz için nükleik asitler ve proteinler içeren süpernatanı toplayın.
Üç mililitre BHI ortamında pCN51 P3 MS2 sRNA veya pCN51 P3 MS2 plazmitlerini taşıyan bir suş kolonisini büyütün, kopyalar halinde mikrolitre eritromisin başına 10 mikrogram ile destek
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin