JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:25 dk. • August 29th, 2025
Ayrı agar plakalarında kültürlenmiş patojenik bakteri suşları ile başlayın.
Her suş, koruyucu bir polisakkarit tabakası olan bir kapsül üretmekten sorumlu genlerde farklı mutasyonlar taşır.
Tek kolonileri plakalardan besin açısından zengin bir sıvı ortam içeren ayrı tüplere aktarın ve inkübe edin.
Kuluçka sırasında, bakteriler üstel büyüme aşamasına girer ve kapsül üreten genleri eksprese eder.
Bu genlerdeki mutasyonlar, kapsül üretiminde varyasyonlara neden olarak kapsüllenmemiş, zayıf kapsüllenmiş ve ağır kapsüllenmiş hücreler oluşturur.
Hücreleri peletlemek için kültürleri aktarın ve santrifüjleyin.
Kapsüllenmemiş ve zayıf kapsüllenmiş hücreler yoğun topaklar oluştururken, ağır kapsüllü hücreler,
hidratlı kapsül tabakaları nedeniyle daha az yoğun bir pelet oluşturur.
Ağır kapsüllü hücreleri kaybetmemek için süpernatanı dikkatlice çıkarın.
Bir tampon ekleyin, tekrar santrifüjleyin ve kalan ortamı ortadan kaldırmak için süpernatanı atın.
Daha fazla büyümeyi teşvik etmeden bakterileri stabilize etmek için tampondaki hücreleri yeniden askıya alın, böylece kapsül yapısını koruyun.
Steril bir halkaya sahip bir stok plakasından tek bir koloni seçin ve 10 mililitre uygun bir et suyu aşılayın.
Kültürü gece boyunca kuluçkaya yatırın. Daha sonra kültürü 15 mililitrelik bir tüpe aktarın ve santrifüjleyin. Ardından, süpernatanı atın ve peleti iki mililitre PBS'de yeniden askıya alın.
Santrifüjlemeyi tekrarlayın ve elde edilen süpernatanı atın. Ardından peleti iki mililitre PBS'de tekrar askıya alın.