JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:35 dk. • August 29th, 2025
Plastik tüplere bağlı iki girişi ve iki çıkışı olan ses dalgası tabanlı bir parçacık ayırıcı olan mikroakışkan akustoforetik bir çip alın.
Gram-negatif ve Gram-pozitif bakterileri, aptamer kaplı mikro boncuklarla birlikte numune girişinden enjekte edin.
Yan yana akışı sürdürmek için tampon girişinden yüksek basınçta bir tampon enjekte edin.
Mikrokanalın içinde, Gram-negatif bakteri zarı üzerindeki lipopolisakkaritler, mikroboncuklar üzerindeki kısa tek sarmallı DNA aptamerlerine bağlanır.
Lipopolisakkaritlerden yoksun olan gram pozitif bakteriler bağlanmaz.
Akış devam ederken, kanal boyunca basınç düğümleri oluşturan akustik dalgalar oluşturmak için piezoelektrik dönüştürücüyü etkinleştirin.
Bu dalgalar, Gram-negatif bakterilere bağlı büyük mikro boncukları merkeze doğru iter ve burada hedef çıkışta toplanırlar.
Bağlanmamış küçük boyutlu Gram pozitif bakteriler etkilenmeden kalır ve atık çıkışına yanlara doğru akar.
Mikroskobik görüntüleme, hedef çıkıştaki Gram negatif bakterilere bağlı boncuklardan artan bir sinyal gösterir ve bunların aptamer destekli akusotoforez ile seçici olarak ayrıldığını doğrular.
PEEK tüplerini iki numune ve tampon enjekte etmek için iki girişe ve atıkları toplamak ve boşaltmak için iki çıkışa bağlayın.
10 mililitrelik bir şırınga kullanarak, mikroakışkan akustoforez kanalını kabarcıksız demineralize su ile doldurun. Sıvı akışını kontrol etmek için iki veya daha fazla çıkış kanalına sahip hassas bir basınç kontrolörü hazırlayın. Cihazı hazırladıktan sonra, hassas basınç kontrol cihazını kullanarak numune girişine iki kilopaskal ve tampon girişine dört kilopaskal basınç uygulayarak numuneyi ve tamponu enjekte edin.
Bir mikroskop kullanarak, bir boncuğa odaklanın ve PZT'yi kullanarak onu mikroakışkan kanalın merkezine taşıyın. Tek kanallı bir fonksiyon üreteci kullanarak 3,66 megahertz'lik bir rezonans frekansı oluşturun ve bir güç amplifikatörü kullanarak tipik bir sinyali 16 desibel yükseltin. Bir floresan mikroskobu ve saniyede 1.200 kare hızında çalışan yüksek hızlı bir kamera ile akustoakışkan çip üzerindeki ayırma ve zenginleştirme işlemlerini gözlemleyin.