JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:37 dk. • August 29th, 2025
İndüklenebilir bir gen içeren bir plazmit ile dönüştürülmüş bakteri kolonilerini ele alalım.
Taze sıvı ortamı aşılamak için tek bir koloni seçin.
Oksijenasyon ve homojen bakteri üremesi için çalkalayarak inkübe edin.
Absorbansı ölçmek ve hücre yoğunluğunu tahmin etmek için seyreltilmiş bir kültür örneği kullanın.
Numuneler arasında hafif çapraz konuşmayı önlemek için siyah duvarlı, cam tabanlı bir kuyu plakası alın ve doğru lüminesans ölçümü sağlayın.
İstenilen hücre konsantrasyonuna sahip bakteri kültürünü kuyucuklara ekleyin.
Plazmit tutulmasını korumak için bir antibiyotik ekleyin.
Gen ekspresyonunu başlatmak için bir indükleyici ekleyin.
Gen, ışık üretmek için belirli bir bakteri proteini ile reaksiyona giren ve bakterilere biyolüminesan özellikler veren bir enzimi kodlar.
Sabit sallama moduna sahip sıcaklık kontrollü bir plaka okuyucuya yerleştirmeden önce buharlaşmayı önlemek için plakanın üzerine bir kapak yerleştirin.
Düzenli aralıklarla, biyolüminesansı izlemek için hücre sayısını ve ışık yoğunluğunu ölçmek için absorbansı kaydedin. Hücre yoğunluğunu biyolüminesans ile ilişkilendirin.
Gece boyunca plakadan tek bir koloni ile 3 mililitre ortamı aşılayın ve hücreleri 28 santigrat derec
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin