Magnetospirillum bakterilerinin yetiştirilmesi ve manyetotaktik davranışlarının değerlendirilmesi

Magnetospirillum, düşük oksijende gelişen hareketli bakterilerdir.

Manyetik dipol görevi gören manyetik nanokristaller üretirler ve jeomanyetik alanı optimal bir oksijen konsantrasyonuna doğru yönlendirmelerine yardımcı olurlar.

Magnetospirillum'u kültürlemek için oksijensiz sıvı ortam alın. Mikroaerobik koşullar oluşturmak, bakteri eklemek ve inkübe etmek için kontrollü bir oksijen hacmi enjekte edin.

Zamanla, bulanıklık artar ve bakteri üremesini gösterir.

Yarı katı bir kültür hazırlamak için, düşük oksijen bölgesinde renksiz hale gelen ve oksik-anoksik arayüzü (OAI) optimum oksijen konsantrasyonu ile işaretleyen pembe bir oksijen indikatörü içeren bir ortam kullanın

.

Bakterileri OAI'de aşılayın, tüpü kapatın ve inkübe edin.

Bakteriler, oksijen tüketildikçe yukarı doğru göç eden bir bant oluşturmak için çoğalır.

Manyetotaktik davranışı değerlendirmek için, kültürlenmiş bakterilerden asılı bir damla hazırlayın ve yanına bir mıknatıs yerleştirin.

Mikroskop altında, mıknatısa doğru yönlü yüzmeyi ve mıknatıs ters çevrildiğinde hareketin tersine dönmesini gözlemleyin.

MSR-1, AMB-1 ve MS-1 suşlarını sıvı ortamda aşılamak için, tıpalara etanol uygulayarak ve bunları bir Bunsen brülörünün alevinden geçirerek oksijen ve taze ortam şişelerinin üst kısımlarını alevlendirin.

Steril bir şırınga ve bir iğne kullanarak, oksijen tüpünden bir mililitre oksijen çıkarın ve taze orta boy şişeye aktarın. Bir cam şişede yetiştirilen başka bir kültürden gelen aşı kullanılıyorsa, her iki şişeyi de alevlendirin. Daha sonra eski kültürün bir mililitresini taze ortama aşılayın.

Kültürü 32 santigrat derecede inkübe edin ve dört ila yedi gün sonra taze ortama aşılayın. MSR-1'i oksijen gradyanı, yarı katı ortamda aşılamak için, taze ortam tüpünün, ortamın yüzeyinin yaklaşık bir ila üç santimetre altında pembe ila renksiz bir arayüz ile somutlaştırılmış, iyi tanımlanmış bir OAI gösterdiğini doğrulayın. Aşı başka bir oksijen konsantrasyonu gradyanlı yarı katı kültürden geliyorsa, bakterinin oluşturduğu bant üzerine yerleştirilen steril bir pipet ucu ile kültürden 50 mikrolitre aspire ederek bakterileri hasat edin.

Arayüzü bozmamak için bu bakterileri OAI'de taze ortamda yavaşça aşılayın. Tüpü kapatın ve bakterilerin 25 santigrat derece ile 30 santigrat derece arasında büyümesine izin verin. Bakterilerin hem manyetik hem de modal olduğundan emin olmak için, mikroskop kapak kızağına bir damla kültür koyun.

Kapak sürgüsünü çevirin ve bir cam kızak üzerinde duran bir O-ringe takın. Damlanın alt sürgüye temas etmediğinden emin olun. Asılı damlayı bir mikroskop altına yerleştirin ve damlacığın bir kenarına odaklanın.

Bir mıknatısın güney kutbunu bu kenara yakın bir yere yerleştirin ve bakterilerin kenara doğru yüzmesini izleyin. Ters yönde yüzmelerini sağlamak için mıknatısı çevirin.