Bakteriyel Enfekte Hücrelerde Endo-Lizozomal Yeniden Şekillenmenin Nanopartikül Aracılı Görselleştirilmesi

JoVE Encyclopedia of Experiments

Mikrobiyoloji

0 görüntüleme • 2:58 dk • August 29th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Floresan etiketli endozomlara sahip insan epitel hücrelerini içeren odacıklı bir slayt alın.

Hücre içi patojenik bakterileri tanıtın ve hücrelere yapışmalarını sağlayarak inkübe edin.

Bakteriler, konakçı hücre iskeletini yeniden düzenleyen proteinleri enjekte eder ve bakterileri vakuollere içselleştiren zar çıkıntıları oluşturur.

Bu vakuoller, hücre içi trafiği düzenleyen bir vezikül ve organel ağı olan endo-lizozomal sisteme bağlanan tübüler çıkıntıları uzatır.

Bu projeksiyonlar vezikül taşınmasını yeniden yönlendirir ve endo-lizozomal sistemi yeniden şekillendirir.

Hücre dışı bakterileri uzaklaştırmak için yıkayın, ardından kalan bakterileri ortadan kaldırmak için antibiyotik içeren bir ortamla inkübe edin.

Antibiyotik içeren serum içermeyen bir görüntüleme ortamı ile değiştirin ve zıt bir florofor ile etiketlenmiş nanopartiküller ekleyin.

Endositoz yoluyla nanopartikül girişine ve yeniden şekillendirilmiş veziküllerde birikime izin vermek için inkübe edin.

İçselleştirilmemiş nanopartikülleri çıkarmak için yıkayın, ardından serum takviyeli bir görüntüleme ortamında inkübe edin.

Floresan nanopartiküller ve etiketli endozomlar, bakterilerin neden olduğu endo-lizozomal yeniden şekillenmenin görselleştirilmesini sağlar.

Bu prosedüre başlamak için, alt kültürlenmiş bakterilerin OD 600'ünü ölçün ve bir mililitre PBS'de 0.2'lik bir OD 600'e seyreltin, 100'lük bir enfeksiyon çokluğu elde etmek için 8 oyuklu odacıklı slayttaki HeLa hücrelerine uygun miktarlarda bakteri ekleyin. Hücre inkübatöründe 30 dakika inkübe edin.

İçselleştirilmemiş bakterileri uzaklaştırmak için HeLa hücrelerini PBS ile üç kez yıkayın. Bu zaman noktası, enfeksiyon sonrası sıfır saat veya sıfır saat p.i olarak ayarlanır. Hücrelere mililitre gentamisin başına 100 mikrogram içeren 300 mikrolitre taze kültür ortamı ekleyin ve bir saat bekletin.

Bir saat sonra, ortamı mililitre gentamisin başına 10 mikrogram içeren görüntüleme ortamıyla değiştirin. 0.1'lik bir OD 520 nihai konsantrasyonu elde etmek için HeLa hücrelerine altın-BSA-rodamin NP'leri ekleyin.

Bir saat kuluçkaya yatırın. Bir saat sonra, ortamı çıkarın ve PBS ile üç kez yıkayın. Son olarak, inkübasyon süresinin geri kalanı için yüzde 10 FCS ve mililitre gentamisin başına 10 mikrogram içeren 300 mikrolitre taze görüntüleme ortamı ekleyin.

08:15

Yanıt olarak lokalize kalsiyum iyon degradeler dev veziküller membran Remodeling

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:05

Endositik alımını ve kültürlü hücrelerde Functionalized Nanobodies kullanarak Trans-Golgi ağına retrograd taşıma analizi

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:40

Maya Toksisitesi ve Bastırıcı Ekranlar Kullanılarak Bakteriyel Efektör Proteinlertarafından Hedeflenen Konak Yollarının Belirlenmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

18:07

Çoklu-spektral Görüntüleme Akım Sitometri tarafından Nanopartiküller ve Bakterilerin Hücresel İçselleştirilmesi Analizi

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:39

Vakuolar Kopma Tek Hücre ölçümleri Hücre içi patojenlerin neden

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:06

Canlı Makrofagların içinde Phagolysosome Biogenesis'den Çalışması

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:38

Floresan Nanopartiküller Uygulama Hücre içi Bakteri tarafından Endo-lizozomal Sistemi Modelleme Eğitim için

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:15

Floresan Probları Kullanan Kültürlü Nöronlarda Endozom ve Lizozom Hareketlerinin Nicelendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:30

Dinamik Protein kompleksleri analiz monte ve kütle spektrometresi ve Elektron Mikroskopisi kullanılarak Biolayer Interferometry biyoalgılayıcı--dan serbest bırakmak

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:25

Mitokondri ve Lizozomlar Arasındaki Etkileşimlerin Görselleştirilmesi için Çift Renkli İlişkili Işık ve Elektron Mikroskobu

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 1 Ağustos 2026