Mycobacterium tuberculosis'ten Siderofor İçeren Hücre Dışı Veziküllerin İzolasyonu

Bir demir şelatörü olan sideroforlar içeren hücre dışı veziküllerin salgılanmasını arttırmak için demir sınırlayıcı bir ortamda yetiştirilen bir Mycobacterium tuberculosis kültürü alın.

Bakterileri peletlemek için santrifüj.

Süpernatanı toplayın ve artık bakterileri uzaklaştırmak için filtreleyin.

Süzüntüyü karıştırılmış bir ultrafiltrasyon sistemine aktarın ve fazla ortamı çıkarmak ve EV'leri konsantre etmek için filtreleyin.

Konsantreyi hücresel kalıntıları peletlemek için santrifüjleyin.

EV peletini toplamak için süpernatanı bir ultrasantrifüj tüpüne ve santrifüje aktarın.

Süpernatanı atın, peleti bir tamponda yeniden süspanse edin ve alt tabakayı oluşturmak için konsantre bir yoğunluk gradyan ortamıyla karıştırın.

Süreksiz bir yoğunluk gradyanı oluşturmak için gradyan ortamının azalan konsantrasyonları ile bindirin.

Üste tampon ekleyin ve santrifüjleyin. EV'ler, kaldırma yoğunluklarına uyan katmana göç eder.

Her kesri ayrı bir tüpte toplayın.

Siderofor içeren EV'lerle saflaştırılmış fraksiyon, sonraki çalışmalar için hazırdır.

Kültürü beş adet 225 mililitrelik konik santrifüj tüpüne aktarın ve 20 santigrat derecede yedi dakika boyunca 2.850 kez g'da santrifüjleyin. Kültür süpernatanını 50