Dış Zar Kaynaklı Hücre Dışı Veziküllerin Bakterilerden İzolasyonu ve Zenginleştirilmesi

Genetiği değiştirilmiş bir bakteri kolonisini sıvı bir ortama aşılayarak başlayın.

Bu bakteriler, dış zarda bir dış koruyucu tabaka olan bir floresan füzyon proteini eksprese eder.

Bakterilerin, floresan proteini içeren, hücreler arası iletişimde yer alan zara bağlı nanoyapılar olan hücre dışı vezikülleri (EV'ler) serbest bırakması için inkübe edin.

Kültürü bir şişeye aktarın ve hücreleri pelet haline getirmek için düşük hızda santrifüjleyin.

EV'leri, hücresel proteinleri ve hücre kalıntılarını içeren süpernatanı aktarın. Yüksek hızda santrifüjleyin ve kalıntı içeren süpernatantı çıkarın.

Kalan bakteri ve kalıntıları ortadan kaldırmak için süpernatanı bir zardan süzün.

Bir numuneyi agar üzerine aşılayın ve inkübe edin. Bakteri kolonisi oluşumunun olmaması, bakteri yokluğunu doğrular.

Daha küçük proteinleri ortadan kaldırırken EV'leri yakalamak için çözeltiyi yarı geçirgen membranlı ve santrifüjlü bir ultrafiltrasyon cihazına aktarın.

Aşağı akış analizi için konsantre EV'leri bir tüpte toplayın.

Tek Escherichia coli kolonilerini steril bir halka kullanarak 250 ila 1000 mililitre Luria-Bertani veya LB suyuna aşılayarak başlayın. Ardından, kültürü aerobik olarak çalkalayan bir inkübatörde daki