Boyut Dışlama Kromatografisi Kullanılarak Bakteriyel Hücre Dışı Veziküllerin İzolasyonu

Tanımlanmış boyutta gözenekli reçine boncukları ile paketlenmiş bir boyut dışlama kromatografisi veya SEC kolonu alın. Üstte bir numune rezervuarı bulunur.

Kolon boncuklarını dengelemek için fosfat tamponlu salin veya PBS ekleyin ve akışı atın.

Hücre dışı veziküller veya EV'ler, salgılanan proteinler ve kirletici maddeler içeren konsantre bir bakteri kültürü filtratı yükleyin.

EV'ler, biyoaktif moleküller taşıyan ve bakteriler tarafından salgılanan lipid bazlı nanoveziküllerdir.

Süzüntü boncuklara girdiğinde, reçine yatağından geçirmek için PBS ekleyin.

Büyük veziküler olmayan kirleticiler içeren ilk elüatı atın.

Çıkışın altına bir toplama tüpü yerleştirin ve sırayla PBS ekleyin.

Büyük boyutlu EV'ler daha küçük reçine gözeneklerinden kaçar, boncuklar arasındaki parçacıklar arası boşluklardan geçer ve önce ayrıştırılır.

Daha küçük proteinler ve kirleticiler gözeneklere girer, daha uzun yollar izler ve daha sonra ayrışır.

EV'leri içeren erken salınımlı fraksiyonları toplayın ve analiz için saklayın.

EV'lerin izolasyonu için, 100 mililitreden daha az başlangıç malzemesi için 10 mililitre yatak hacmine sahip küçük bir kolon ve 100 mililitreden fazla başlangıç malzemesi için 47 mililitre yatak ha