İmmünolojik Sinaps Oluşumu Yoluyla T Hücrelerinin İn Vitro Bakteriyel Transenfeksiyonu
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:05 dk. • September 26th, 2025
Ovoalbümin peptidine veya OVAp'ye özgü reseptörleri eksprese eden CD4+ T hücrelerini içeren kuyucuklarla başlayın.
Negatif kontrol kuyusuna gözenekli bir membran eki yerleştirin.
Bir tüpte, bakterilerle enfekte olmuş ve yüzey sunumu için OVAp yüklü dendritik hücreleri alın.
Dendritik hücreleri doğrudan test kuyusuna ve negatif kontrol kuyusundaki ek parçaya ekleyin.
Kuyucuklara ortam ekleyin ve inkübe edin.
Test kuyusunda hücreler, transenfeksiyon olarak bilinen bir süreç olan dendritik hücreden T hücresine bakteri transferini kolaylaştıran immünolojik bir sinaps oluşturmak üzere etkileşime girer.
Negatif kontrol kuyusunda, membran bariyeri hücre-hücre etkileşimini önler, böylece transenfeksiyonu inhibe eder.
Antibiyotik gentamisin'i kuyucuklara ekleyin ve inkübe edin.
Gentamisin ökaryotik hücrelere nüfuz edemez, böylece içselleştirilmiş bakteriler hayatta kalırken sadece içselleştirilmemiş bakterileri öldürür.
Enfekte T hücrelerini içeren test numunesi ve enfekte olmamış T hücrelerine sahip kontrol numunesi artık T hücresi izolasyonu ve transenfeksiyon ölçümü için hazırdır.
24 oyuklu bir kültür plakasına, beş kuyucuğun her birine 0,5 mililitre hacimde iki milyon CD4+ T hücresi ekleyin.
Daha
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin