Sabit Medya Akışı Altında Primer İnsan Endotel Hücrelerine Pnömokok Bağlanmasının Değerlendirilmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:20 dk. • September 26th, 2025
Mikroakışkan bir pompaya bağlı jelatin kaplı bir kanal slaytını mikroskop tablasına yerleştirin.
Slayt, hücre yüzeyinde bir glikoprotein olan von Willebrand faktörü veya VWF dizileri ile akan ortam altında kültürlenmiş birincil insan endotel hücrelerini içerir.
Bu sicimler, hücrelerin histamin ile uyarılmasıyla üretilir.
Mikroakışkan pompa aracılığıyla uygulanan kontrollü ortam akışı, VWF salgılanmasını ve çözülmesini destekler. Bu, VWF dizelerindeki belirli bağlama alanlarını ortaya çıkarır.
Medya akışını durdurun, yeşil bir florofor konjuge VWF'ye özgü antikor ekleyin ve dizileri antikorla etiketlemek için akışa devam edin.
Medya akışını duraklatın ve kırmızı floresan protein eksprese eden pnömokok bakterilerini tanıtın.
Bakterileri dağıtmak için akışı yeniden başlatın ve yüzey adezinleri yoluyla açıkta kalan alanlara bağlanmayı sağlayın.
Floresan mikroskobu kullanarak dizilere gerçek zamanlı bakteri bağlanmasını görselleştirin.
Medya akışını durdurun ve endotel hücrelerine bakteri bağlanmasını ölçmek için Z-yığını görüntüleri elde edin.
Mikroskobik görselleştirme için akışkan üniteyi 37 santigrat derecelik ısıtma odasına yerleştirin. Kanal slaytını önceden ısıtılmış bir mikroskobun tabla
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin