JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:48 dk. • September 26th, 2025
Fosfat tamponlu salin içinde çözülmüş, amiloide özgü bir floresan boya olan tiyoflavin T'nin çalışan bir çözeltisini içeren bir küvet alın.
Küveti bir spektroflorometreye yerleştirin ve temel floresan sinyalini kaydedin.
Taramayı duraklatın ve küveti çıkarın.
Virülan Pseudomonas bakterileri ile enfekte olmuş pulmoner endotel hücrelerinden toplanan filtre ile sterilize edilmiş kültür süpernatanını ekleyin.
Süpernatan, yanlış katlanmış, beta tabakası açısından zengin proteinler olan amiloid agregatları içerir.
Eşit dağılım sağlamak için içeriği ters çevirerek yavaşça karıştırın.
Küveti spektroflorometreye yeniden yükleyin ve zamana dayalı bir floresan sinyali elde etmek için taramaya devam edin.
Tiyoflavin T, spesifik olarak beta tabakası açısından zengin amiloidlere bağlanır ve bu da floresansın artmasına neden olur.
Aynı ayarları kullanarak bir floresan taraması gerçekleştirin.
Başlangıca göre floresandaki bir artış, kültür süpernatanında enfeksiyona bağlı amiloidlerin varlığını ve nispi bolluğunu gösterir.
Süpernatan içindeki amiloidleri ölçmek için, bir mililitrelik spektrofotometre küvetinde bir mililitre PBS'ye 20 mikrolitre taze hazırlanmış ve filtrelenmiş 50X tioflavin T stok çözeltisi
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin