Biyolüminesans Kullanarak Farede Bakteriyel Enfeksiyon Dinamiklerini İzleme
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 4:35 dk. • September 26th, 2025
Patojenik bir bakterinin zayıflatılmış bir suşunun süspansiyonu ile başlayın.
Zayıflatılmış suş, virülans genlerinde hedeflenen delesyonlar nedeniyle azalmış patojenite gösterir.
Bakteriler, otonom ışık üretimini sağlayan biyolüminesans bir operon ile kromozomal olarak etiketlenmiştir.
Bakteriler, bir lusiferaz enzimi ve lusiferaz substratını sentezleyen bir enzim kompleksi üreterek biyolüminesans operonu eksprese eder.
Lusiferaz, görünür ışık üretmek için substratı oksitler.
Süspansiyonu santrifüjleyin ve süpernatanı atın.
Hücreleri bir tamponla yıkayın, tekrar santrifüjleyin ve kalan hücresel olmayan bileşenleri çıkarmak için süpernatanı atın.
Optimal bir bakteri konsantrasyonu elde etmek için hücreleri tamponda yeniden süspanse edin ve süspansiyonu bir şırıngaya çekin.
Süspansiyonu intraperitoneal olarak bir fareye enjekte edin, ardından bir kafese aktarın.
Biyolüminesans sinyalini düzenli aralıklarla görselleştirin.
Zayıflatılmış suş lokalize kalır ve biyolüminesans yavaş yavaş azalır, bu da enfeksiyonun temizlendiğini gösterir.
Enjeksiyonların sabahı, bakteri hücrelerinin dondurularak saklanan yumurtalarını üç ila dört saat boyunca dört santigrat derecede çözün. Çözdürdükten sonra şişele
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin