JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:27 dk. • September 26th, 2025
Bir antibiyotik seçim ortamında rekombinant Pseudomonas aeruginosa kültürü ile başlayın.
Bu bakteriler, silinmesi amaçlanan bakteriyel hedef genin yakınında genoma entegre edilmiş replikatif olmayan bir plazmit barındırır.
Entegrasyon, plazmit ve genom arasında paylaşılan homolog diziler yoluyla meydana geldi ve tek bir çaprazlama rekombinasyonu ile sonuçlandı.
Plazmit, bir antibiyotik direnç genini ve sükroz duyarlılığı sağlayan sacB genini kodlar.
Bakterileri sakaroz içeren ancak antibiyotik içermeyen bir ortama çizin ve inkübe edin.
Antibiyotik basıncı olmadan, homolog bölgeler arasında plazmit ve hedef geni eksize eden ikinci bir rekombinasyon veya çift çaprazlama meydana gelir.
Bakteri çoğalması sırasında, eksize edilen plazmit aktarılmaz ve bu da bakterileri sükroza toleranslı hale getirir.
Bakterileri seçici olmayan bir ortama ve sakaroz veya antibiyotik içeren bir ortama yamalayın ve inkübe edin.
Seçici olmayan ve sakaroz ortamında büyüme, ancak antibiyotik ortamında değil, başarılı bir çift çaprazlamayı doğrular.
Pseudomonas Isolation Broth veya PIB'de tek çaprazlama, rekombinant koloniler yetiştirerek başlayın. Her kültürün 10 mikrolitresini önceden ısıtılmış PIA plakalarına aşıla
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin