JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:36 dk • September 26th, 2025
Bir kaynak içeren ve Streptomyces venezuelae bakterilerinin tüm yaşam döngüsünü destekleyen besin açısından zengin bir ortamla doldurulmuş bir şişeyle başlayın.
Bakteri sporlarını ortama aşılayın ve uygun havalandırma ve besin dağılımını sağlamak için çalkalayarak inkübe edin.
Yay, karıştırmayı artırır, düzgün ve tutarlı büyümeyi destekler.
Sporlar besinleri emer ve filizlenir, uçlarında uzanan, hiflere ayrılan ve misel bir yapıya dönüşen germ tüpleri üretir.
Besinler sınırlı hale geldikçe, organizma bölünen ve sporlar, uyuyan üreme hücreleri üreten özel sporojenik hifler üretir.
Misel parçalarının ve sporlarının varlığını doğrulamak için faz kontrast mikroskobu altında gözlemleyin.
Daha ağır misel kalıntılarını peletlemek için kültürü santrifüjleyin ve süpernatantta daha hafif sporlar bırakın.
Süpernatanı bir mikrotüpe aktarın ve erken çimlenmeyi önlemek için buzun üzerine koyun.
Spor süspansiyonunu taze ortamda seyreltin ve daha fazla kullanıma kadar soğuk koşullarda saklayın.
30 mililitre takviye edilmiş büyüme ortamını, görüntülenecek S.venezuela suşundan 10 mikrolitre sporla aşılayın. Hücrelerin tutarlı büyümesi ve sporlanması için, yeterli havalandırmaya izin vermek için şaşkın bir şişe veya yay içeren bir şişe kullanın.
Hücreleri 30 santigrat derece ve 250 RPM'de 35 ila 40 saat kültürleyin. Hazır olduğunuzda, misel parçalarını ve sporlarını sıvıya monte edilmiş faz kontrast mikroskobu ile görebilmeniz gerekir. Miselyumu ve daha büyük hücre parçalarını peletlemek için kültürün bir mililitresini bir dakika boyunca 400 kez G'de bir masa üstü santrifüjde santrifüjleyin.
Daha sonra bir spor süspansiyonu içeren yaklaşık 300 mikrolitre süpernatantı yeni bir 1,5 milimetrelik tüpe aktarın ve tüpü buzun üzerine yerleştirin.